8溴环磷酸腺苷对单核细胞株THP1中ABCA1及细胞间黏附分子的影响.docVIP

8溴环磷酸腺苷对单核细胞株THP1中ABCA1及细胞间黏附分子的影响 作者：李建华 杨永红 贾军宏 吴平生 郭志刚 【摘要】 　　目的 观察8BrcAMP刺激下，单核细胞株THP1中ABCA1、细胞间黏附分子1（ICAM1）及 白介素1β（IL1β）mRNA和蛋白质表达的变化，阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化（AS）形成中的可能机制。方法 复苏培养THP1单核细胞，加入8BrcAMP(0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h，设未加刺激同时孵育24 h的细胞为阴性对照组；以荧光定量RTPCR和Western印迹法及ELISA法检测ABCA1、ICAM1及IL1β mRNA和蛋白质表达量；用ABCA1的反义寡核苷酸（100 nmol/L）转染THP1细胞，给予8BrcAMP刺激，同样的方法观察上述指标的改变。结果 予8BrcAMP刺激后，THP1细胞中ABCA1、ICAM1 mRNA和蛋白质及IL1β蛋白质表达均增高，给予反义寡核苷酸转染后氧化低密度脂蛋白（OxLDL）刺激3、6 h上述指标的mRNA表达降低 (P0.01)，12、24 h蛋白质表达降低 (P0.01)。结论 THP1单核细胞中，8BrcAMP激活ABCA1不仅可增加细胞内胆固醇外运，还具有增加炎症因子表达的作用，在AS的发生中发挥双重作用。 【关键词】 THP1单核细胞；ABCA1； 动脉粥样硬化；炎症因子 【Abstract】 Objective To investigate the effects of 8BrcAMP on ABCA1，ICAM1，IL1βin human monocytes THP1 after the treatment with 8BrcAMP.Methods 8BrcAMP (0.5 mmol/L) were added into culture media and THP1 cells were harvested at 3，6，12 and 24 hours.The mRNA and protEin levels of ABCA1、ICAM1 and IL1βwere investigated by realtime fluorescent quantitative PCR，Western blot and ELISA methods.After phosphorothioate antisense oligonucleotides of ABCA1 mixture were add to culture media at a final concentration of 100 nmol/L.Results The mRNA and protEIn of ABCA1，ICAM1 and IL1βamount were increased after the incubated with 8BrcAMP.After transfection with antisense oligonucleotides of ABCA1，the expression of mRNA levels were decreased at 3 and 6 hours，and protein were decreased at 12 and 24 hours.Conclusions ABCA1 can contribute to atherosclerogenesis by increasing the expression of ICAM1 induced by 8BrcAMP in THP1 cells. 【Key words】ATPBinding Cassette A1 (ABCA1)；THP1 cell；Atherosclerosis；ICAM1 　　动脉粥样硬化(AS)过程是一个血管受损后的炎症反应过程，高密度脂蛋白胆固醇(HDLC)水平与AS的发病率呈负相关。HDLC主要通过参与体内胆固醇逆转运（RCT）行使其抗AS功能。ATP结合盒转运蛋白1（ABCA1)的细胞膜蛋白介导了过剩的细胞内胆固醇外运分泌入高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）的代谢途径〔1〕。随着对ABCA1研究的深入，发现ABCA1不仅仅影响血脂，还与AS及泡沫细胞形成有明显的关联〔2〕，本研究以单核细胞株（THP1）为靶点，观察在ABCA1诱导因素8溴环磷酸腺苷（8BrcAMP）的作用下， ABCA1对细胞间黏附分子1（ICAM1）及白介素1β（IL1β）mRNA、蛋白质表达的影响，以阐明ABCA1基因在AS形成中新的可能机制。 　　 1 材料与方法 　　1.1 材料 　　THP1细胞株、培养基RPMI1640