cmyc、cfos mRNA及相关蛋白在糖尿病大鼠心肌细胞中表达的研究.docVIP

cmyc、cfos mRNA及相关蛋白在糖尿病大鼠心肌细胞中表达的研究 作者：纪征 尚小明 张燕 杨秀兰 李燕 李霞 【摘要】 目的 观察2型糖尿病状态下大鼠心肌细胞中cmyc、cfos mRNA及相关蛋白的变化。方法 50只雄性SD大鼠随机分为对照组（15只）和糖尿病组（35只）。对照组喂养标准饲料，糖尿病组喂养高脂饲料。喂养8 w后，检测空腹血糖、口服糖耐量试验、胰岛素抵抗指数（IRI）及血糖钳技术，证实糖尿病组大鼠产生了胰岛素抵抗。大鼠腹腔内注射STZ 25 mg/kg，血糖＞7.8 mmol/L为糖尿病大鼠模型，继续用高脂饲料喂养6 w。14 w时，用RTPCR方法检测两组大鼠心肌cmyc、cfos mRNA变化，用Western blot方法检测心肌相关cmyc、cfos蛋白变化。结果 高脂饲料喂养8 w时，糖尿病组空腹血糖高于对照组（P＜0.05）；IRI较对照组明显升高（P＜0.05）。14 w时，糖尿病组体重和空腹血糖高于对照组（P＜0.05），cmyc mRNA表达水平与对照组比较无显著性差异，cfos mRNA表达水平较对照组明显降低（P＜0.05），cmyc蛋白表达水平与对照组比较无显著性差异，cfos蛋白表达水平较对照组明显降低（P＜0.05）。结论 cmyc、cfos mRNA及其蛋白在糖尿病心肌中的表达可能存在时相性，cfos mRNA及其蛋白在糖尿病心肌病变的分子水平信号通路中异常表达，可能与糖尿病心肌病的发生 发展 相关。 【关键词】 糖尿病心肌病；细胞凋亡；增殖；cmyc；cfos 糖尿病心肌病是一种特殊类型的心肌病，凋亡在糖尿病心肌病变中起关键作用，糖化血清白蛋白能够增加早期反应基因cfos水平〔1～3〕，cmyc具有促进细胞凋亡的作用，cfos具有双重作用。但目前关于糖尿病心肌病变中cmyc、cfos mRNA及蛋白表达的报道较少，表达水平有无改变有待进一步阐明。本文着重探讨糖尿病状态下心肌细胞增殖和凋亡相关基因cmyc、cfos mRNA表达水平变化，及cmyc、cfos 相关蛋白水平的变化，探讨糖尿病大鼠心肌发生凋亡的分子生物学机制，为糖尿病心力衰竭的防治提供理论依据。 　　 1 材料与方法 　　1.1 动物 8周龄雄性清洁级SD大鼠50只，体重200～220 g，由河北医科大学实验动物中心提供（合格证编号：903200）。随机分为对照组（15只）及糖尿病组（35只）。对照组应用普通饲料喂养（碳水化合物65.5%，脂肪10.3%，蛋白质24.2%），糖尿病组应用高脂饲料喂养（碳水化合物20.1%，脂肪59.8%，蛋白质20.1%）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 仪器与试剂 低温冰箱（日本SANYO公司），GHK2FGS显微镜（日本Olympus公司），制冰机（日本SANYO公司），血糖/血酮仪OptiumTM（美国强生公司），低温高速离心机HITACHI20PR52D（日本东芝公司），HM315组织切片机（德国Walldorf公司），Humalyzer半自动生化仪（德国豪迈公司），光镜照相机MICRODPHOTFXA（日本Nikon公司）。链脲佐菌素（STZ，德国SERVA公司），RT试剂盒（Fermentas公司），PCR试剂盒（ Promega公司）。 　　1.2.2 模型制备 参照 文献 〔4～6〕方法建立2型糖尿病(T2DM)大鼠模型。两组大鼠饲养8 w后，对照组及糖尿病组各随机抽取5只大鼠，通过空腹血糖测定、口服糖耐量试验（OGTT）、空腹胰岛素水平（FINS）、胰岛素抵抗指数（IRI）及血糖钳技术证实糖尿病组大鼠产生了胰岛素抵抗。其余20只糖尿病组大鼠禁食12 h后一次性腹腔内注射小剂量2%STZ 25 mg/kg，注射72 h后尾静脉采血，测定禁食6 h后的空腹血糖，血糖＞7.8 mmol/L为2型糖尿病大鼠模型，继续用高脂饲料喂养6 w。 　　1.2.3 检测指标 动物饲养8 w，空腹12 h后，用50％葡萄糖灌胃(2 g/kg)，割尾取血，用OptiumTM血糖/血酮仪按常规快速测定仪检测0、30、60、120 min血糖。FINS采用竞争性放射免疫分析法测定，放射性125I胰岛素同样品中的胰岛素抗体竞争反应，按常规操作进行。正葡萄糖钳夹实验测定胰岛素敏感性，记录稳态下连续120 min的葡萄糖输注速率。取稳态下6 次葡萄糖输注速率的平均值作为稳态葡萄糖输注速率〔GIR， mg/(kg·min)〕，反映机体对胰岛素的敏感性。参照文献〔7，8〕方法，依据公式〔IRI=(FBG×FINS)/22.5〕 计算 IRI值。 　　1.2.4 cmyc、cfos mRNA表达的测定 14 w时，大鼠禁食12 h，次日6 ml/kg乌拉坦腹腔注射麻醉，迅