几种中药提取物对不同病原菌的抑制作用.docVIP

　　几种中药提取物对不同病原菌的抑制作用 随着时代的发展，人们健康意识的逐渐提高，环境与农产品的安全性受到了广泛重视，而且对农药残留的限制也要求的很严格。近年来，化学农药被大量使用于农业生产中，由于多数在自然环境中不易降解，蓄积能力强，导致污染了环境，使病虫害产生了抗药性，破坏了生态平衡，农作物及畜产品中农药残留量超标，危害了人体健康。而最值得注意的是生产这些化学农药过程中三废的排放问题，按我国1998年生产化学农药约18万t计，年排放的三废超过40万t[1]。因此，化学农药的使用量势必会不断下降，而植物源农药将替代化学农药广泛应用于农业生产中。 中国 8/vie 　　植物源农药的活性成分是自然存在的物质，在自然界中的降解不污染环境，不会对人体产生危害，且低毒、低残留、病虫害不易产生抗药性， 农产品的高品质能够得到充分保留。植物源农药活性成分复杂，通常能作用于靶标生物的多个位点，有利于延缓靶标生物的抗药性；有些植物源农药还能刺激植物生长，起到生长调节作用[2]。因此植物源农药在农业生产中具有广阔的应用前景。 　　纪淑娟等对丁香抑菌成分超声波提取工艺进行研究，得到以95%乙醇为溶剂的提取物对灰葡萄孢菌的抑菌率为62.47%[3]；杨帮等对美洲商陆抑菌活性进行研究，得出以极性强的甲醇为溶剂对柑橘绿霉病和小麦纹枯病2种病原菌的抑菌率均达100%[4]；崔永明等在甘草总黄酮的提取技术及其抑菌活性研究中指出甘草总黄酮对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用均较为明显[5]；杨国平等通过天南星提取物对小鼠S180肉瘤的抑制作用的研究，得出天南星醇提物对小鼠S180肉瘤表现出明显的抑制生长作用，并未造成明显毒害作用[6]。根据上述文献可知，丁香、商陆、甘草、天南星对不同致病菌有很强的抑制生长作用，而为研究不同中药提取物对不同致病菌的抑制作用，本试验选用8种中药材的提取物对4种主要致病菌进行抑菌活性研究，以筛选出?χ饕?致病菌有抑制作用的中药提取物，对于开发和利用我国丰富的中药植物资源，有着十分重要的意义。 　　1 试验材料 　　1.1 试验仪器与试剂 　　LRH―280型微电脑控制生化培养箱、LDEX―40SCⅠ型立式自动电热压力蒸汽灭菌器、无菌操作台、高压蒸汽灭菌锅、回流提取器、HH―S型恒温水浴锅、培养皿、试管、分析天平?p托盘天平?p玻璃棒?p烧杯、量筒、锥形瓶、玻璃吸管?p酒精灯?p涂布棒、打孔器、接菌环、挑针、记号笔等。95%乙醇、75%乙醇、无菌水等。 　　1.2 供试菌种 　　金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli），由吉林农业科技学院微生物实验室提供；带有薏苡弯孢叶斑病菌的病叶和菜豆灰霉病菌的病果，均采自吉林农业科技学院九站校区药植园。 　　1.3 供试药材 　　辛夷（Magnolia biondii Pamp.）的干燥花蕾、艾蒿（Artemisia argyi Levl.et Van.）的干燥叶、北豆根（Menispermum dahuricmn DC.）的干燥根茎、天南星[Arisaema erubescens （etaplexis japonica （Thunb.） Mark.]的干燥全草，以上药材均购自国营中药材药店。 　　1.4 培养基 　　PDA培养基：土豆 200g，葡萄糖 20g，琼脂 20g，水 1000ml；高温湿热灭菌：121℃ 30min。 　　牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl 5g，琼脂 20g，水 1000ml；pH 7.0-7.2；高温湿热灭菌：121℃ 30min。 　　2 试验方法 　　2.1 病原菌的分离、纯化与鉴定 　　2.1.1 薏苡弯孢叶斑病菌的分离、纯化与鉴定 　　取带有病斑的薏苡叶，于病健交界处剪成2mm×5mm的长方形小块，在无菌操作台中对其进行表面消毒，先置于75%乙醇中灭菌25s，取出，然后放入到0.1%升汞中灭菌3-5min，取出，再放入到无菌水中洗涤3次。 　　将上述经灭菌的病组织采用五点法接种于PDA培养基上培养，倒置于28℃的恒温箱中培养3-5d，观察菌体生长情况，挑取组织边缘长出的菌丝，接种到新培养基中，多次重复挑取、接种，进行纯化。 　　根据左淑珍等对玉米弯孢菌叶斑病及其抗源鉴定、抗性遗传研究现状鉴定此种病菌为薏苡弯孢叶斑病菌（Coix curvularia lunata）[7]。 　　2.1.2 菜豆灰霉病菌的分离、纯化与鉴定 　　菜豆灰霉病菌的分离采用菌丝直接挑取培养法。将带病的病果用无菌水擦洗干净，在无菌操作台上，用75%乙醇擦拭没有菌丝的部分进行表面消毒，用消毒过的镊子拨开表层菌丝，挑取内层的菌丝，将其接种于PDA平板培养基上，倒置