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妇科门诊患者HPV6 11 16 18分型检测及结果分析 作者：杨笔文 王贵珍 董学君 郑专 陈建军 【关键词】 妇科 　　人乳头状瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是一种嗜人体皮肤和粘膜组织细胞的病毒，可广泛感染人类皮肤及生殖道、呼吸道上皮组织，与人类的多种良恶性肿瘤密切相关。在发现的HPV型中，约有30种可以感染生殖道。根据其致病性差异，可分为低危型HPV（如6、11、42、43、44型）和高危型HPV（如16、18、31、33、39、45、51、52、58、59、68型）。低危型HPV主要导致尖锐湿疣，而高危型HPV还与宫颈癌密切相关。为了解本地区女性HPV感染情况，作者对1014例本院就诊患者作HPV6/11、HPV16/18型的荧光定量聚合酶链反应（PCR）基因分型检测，旨在积累本地区女性HPV6/11、HPV16/18型感染的分子流行病学资料，为预防提供对策。 　　1 资料与 方法 　　1.1 一般资料 本院2005年2月至2006年7月，妇科和性病门诊就诊的泌尿生殖道炎患者共1014例，均为女性，年龄17～60岁。 　　1.2 标本采集 用棉拭子先除去宫颈口处多余的分泌物，另用棉拭子伸入宫颈内1～2cm 处转动10～30s，取含有柱状上皮细胞的标本，洗涤在盛有1ml 生理盐水的带盖离心管，送检。 　　1.3 仪器及试剂 Light Cycler荧光定量PCR仪（ Roche公司）；HPV6/11、HPV16/18型荧光定量PCR试剂盒（中山大学达安基因股份有限公司生产）。 　　1.4 病原体DNA提取 吸取送检标本1ml置1.5 ml离心管中，12000 rpm离心5 min，弃上清液。沉淀加1 ml无菌生理盐水，混匀，12000 rpm离心5 min，再重复洗涤一次。在沉淀中加入裂解液，充分混匀后100裂解10 min，4 12000 rpm离心5 min，取上清液2μl 做PCR反应。 　　1.5 检测方法 HPV病原体DNA定量检测采用实时荧光定量PCR技术［１］，反应体系及扩增条件参照说明书。 　　1.6 统计学处理 所有数据采用SPSS for Window 10.0 软件包。 　　2 结果 　　2.1 1014例标本HPV6/11、HPV16/18检测的阳性率 HPV6/11、HPV16/18型检测阳性率见表1。低危型远高于高危型，二者阳性检出率差异有显著性（P0.001）。 　　2.2 HPV6/11、HPV16/18阳性患者的年龄分布不同年龄段的感染情况见表2。HPV6/11型感染主要集中在20～40岁，其中20～30岁组阳性率最高；HPV16/18型感染者年龄均在40岁以上，其中以41～50岁组较高。 　　表1 1014例标本HPV6/11、HPV16/18型的检测结果（略） 　　表2 不同年龄组患者的感染情况（略） 　　3 讨论 　　普通人群中HPV感染已不少见，生殖器HPV感染率在许多国家近10年来保持相对稳定，有的甚至下降；但在我国，自80年代以来与尖锐湿疣（Condylomaacuminata, CA）相关的HPV6/11型感染率大幅度增加， 目前 已跃居国内性病的第二位。陈军生等［２］对6835例患者进行详细统计 分析 后得出，CA感染率为22.12％，龚向东等［３］也有类似的报道；而本组数据，HPV6/11型阳性率更高，为27.9％，提示本地区CA总体感染水平较高，应该引起相关部门的重视。高危型HPV与宫颈癌密切相关，曾维英等［４］对192例就诊者宫颈拭子进行HPV检测，HPV16/18型阳性率达28.1％，远高于本组HPV16/18型检测阳性率为9.1％的结果，HPV16/18检测阳性率的差异可能由于地域差异和检测人群的差异引起。高危型HPV16/18的感染主要在40岁以上年龄组，与宫颈癌发病高峰在50岁左右相吻合；但40岁以下组HPV16/18感染率低的原因尚待进一步 研究 。 　　据统计，世界范围内每年约有45万的宫颈癌新发病例，我国估计有11万，占1/4左右；在各类肿瘤中，子宫颈癌的发病率在世界范围内居女性恶性肿瘤的第二位，在一些 发展 中国 家和地区仍居第一位。机体感染HPV后，机体免疫系统可识别感染细胞并加以消除；若病毒基因整合到宫颈细胞，感染细胞继续存活并增生，就可能发展为癌前病变或宫颈癌。从HPV感染发展到宫颈癌需要经历数年时间，早期 治疗 的宫颈癌患者5年生存率高达90％，故宫颈癌病变早期筛查及HPV的检测，对宫颈癌的防治具有重要意义。 　　选择灵敏度高、特异性强的HPV的分型检测 方法 ，是实现早期筛查的保证；本实验采用的实时荧光定量PCR技术，结合了PCR的高灵敏性和探针杂交的高特异性，能准确区分型别并在数小时内获得结