维生素B1、B2的定性实验.pptVIP

实验二：维生素B1、B2的定性试验 （一）维生素B1的定性试验 一、目的和要求 了解化学鉴定维生素B1的方法及其原理。 二、原理 维生素B1（抗神经炎维生素）属于水溶维生素。因含有硫及氨基，又名硫胺素。它在植物性食物中分布极广，谷类种子表层中含量更为丰富。麦麸、米糠和酵母粉均为维生素B1的良好来源。 维生素B1的化学鉴定法有以下列两种： 1、重氮苯磺酸反应： 在碳酸氢钠存在的情况下，硫胺素能和重氮苯磺酸作用产生红色。加入少量甲醛使红色稳定。 2、荧光反应： 硫胺素经轻微氧化作用后，即生成黄色而带蓝色荧光的硫胺素（硫色素、硫胺荧）。溶异丁醇中的胱氨硫素显示的蓝色荧光，在紫外光下更为显著。此反应非常灵敏，可以测出0.01微克维生素B1。 三、试剂 1、米糠或麦麸 2、0.1N硫酸溶液。 3、0.2%硫胺素溶液。 4、1%铁氰化钾溶液。 5、30%氢氧化钠溶液。 6、异丁醇。 7、重氮试剂。 四、器材 试管及试管架 漏斗 量筒 吸量管 台秤 紫外灯 五、方法 （一）重氮苯磺酸反应 取一支试管，取1g米糠或麦麸倒入其中。加入5ml0.1N硫酸，用力振荡15分钟提取硫胺素。静置10分钟后过滤。取滤液1ml，加入1.5ml碱性碳酸氢钠溶液和1ml重氮试剂。摇匀后在10分钟内观察深红色的出现。 （二）荧光反应 取0.2%硫胺素溶液1~2ml，加入铁氰化钾溶液2ml及30%氢氧化钠溶液1ml。充分混匀后再加入2ml异丁醇，充分振荡。待两液相分开后，观察上层异丁醇溶液中的蓝色荧光。 （二）维生素B2的定性试验 一、目的和要求 了解荧光法定性鉴定维生素B2的原理及操作方法。 二、原理 维生素B2的水及酒精中性溶液为黄色，并具有很强的荧光。这种荧光在强酸和强碱中易被破坏,维生素B2可被亚硫酸盐还原成无色二氢化物，失去荧光，二氢化物在空气中易重新被氧化，恢复其荧光。 三、试剂 核黄素溶液（30微克/毫升） 2.5%亚硫酸氢钠溶液(用2%碳酸钠溶液作溶剂) 四、器材 试管及试管架 量筒 紫外灯 五、方法 取2支试管，各加入核黄素溶液1ml，观察其黄绿色荧光。在一管中加入5—10滴亚硫氢钠溶液比较两管荧光。充分摇匀后，再随时比较两管荧光，最好在紫外光下观察。