双荧光mRFP-eGFP-LC3体系在细胞自噬中的作用.pdfVIP

第 40 卷 第 10 期 贵 阳 医 学 院 学 报 Vol． 40 No． 10 2015 年 10 月 JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE 2015． 10 * ＊ 双 荧光 mRFP- eGFP-LC3 体系在 细胞 自噬中的作用 ＊＊ 黄 ， ， ， 桢钧 刘 彬 刘本荣 刘少军 ( ， 510260) 广州心血管疾病研究所 广州医科大学附属第二 医院 心内科 广东 广州 ［ ］ : mRFP-eGFP-LC3( ptfLC3) 。 : 摘 要 目的 探讨双荧光 体 系在细胞自噬 中的作用 方法 采用不 同浓度雷帕 霉素( 50 、100、200 、500 、1 000 nmol /L) 处理人胚 肾细胞( HEK293) ， 白印迹法检测不 同浓度雷帕霉素组中自 噬 蛋 ( LC3 ) LC3-II /LC3-I ; GFP-LC3 mRFP-eGFP-LC3 标记蛋白 蛋白 的表达及 比值 单荧光 质粒 和双荧光 质粒 转染 HEK293 ， ( 200 nmol /L) 3 h ， ， HEK293 细胞 雷帕霉素 处理 采用荧光显微镜统计 并 比较两种方法转染后 细胞 内 LC3 亮点的变化 。结果: 不 同浓度雷帕霉 素处理 HEK293 细胞 ，LC3-II 蛋白 和 LC3-II /LC3-I 比值均增加; 转染 GFP-LC3 ， HEK293 ; mRFP-eGFP-LC3 ， 质粒时 雷帕霉素处理 细胞中绿色亮 点的数量增加 转染 质粒 时 雷帕霉 素 处理 HEK293 细胞中绿色和红色亮点数量均增加 。结论: 双荧光 mRFP-eGFP-LC3 体系优于单荧光 GFP-LC3 体 ， ， ， 。 系 更能全面完整地反映细胞自噬水平 能够反映细胞 内 自噬流的变化 是自噬定量分析 的可靠方法 ［ 键词 ］ ; ; ; LC3; GFP-LC3 ; mRFP-eGFP-LC3 关 雷帕霉素 自噬 人胚 肾细胞 单荧光 质粒