实验五： 荧光法测定溶液中镉离子.pptVIP

实验五：荧光法测定溶液中镉离子 一、荧光是什么东西？ 荧光是一种光致发光现象。 具有荧光特性的物质在紫外光照射下会发出可见光。所发出的光被称为荧光。照射荧光物质的光被称为激发光。 荧光是一种发射光，其波长比激发光波长要长。（能量低于激发光） 一种荧光物质发射的荧光颜色基本上是不变的。与激发光波长几乎无关。 日常所见的荧光 电脑、电视显示屏上涂有荧光物质 日光灯管内壁涂有荧光物质 白色布料用荧光染料处理以增白 涂有颜料的纸张色彩鲜艳。 标证上印刷的荧光防伪图案 荧光笔 这些现象可不是荧光 夜光（磷光）：夜光表、心电监护仪屏幕 荧光棒(化学发光) 萤火虫（生物发光） 鬼火（磷火） 利用荧光可以： 对溶液中的荧光物质成分进行定量分析。 用荧光探剂与待测物质结合后进行定量分析 用荧光标记物对组织切片或培养细胞染色在荧光显微镜下进行观察。 荧光法可测定的部分物质： 血液中成分：维生素、氨基酸、硒…. 药物：阿霉素、水杨酸、…. 荧光法与其他仪器联用 液相色谱仪中使用荧光检测器 流式细胞仪检测细胞荧光。 溶液中荧光物质的定量分析 用荧光分光光度计检测样品的荧光强度，根据朗伯-比尔定律来定量。在浓度范围不大的情况下用直线标准曲线拟合定量。 荧光法定量分析基本过程 处理样品。除去干扰物，浓缩被检物。 用荧光探剂与被检物反应生成荧光物质。 检测空白样品荧光强度。 检测样品荧光强度。 测量标准样品荧光强度，建立标准曲线方程。 计算样品浓度。 荧光法测定镉离子 条件试验--pH值条件 H+ 离子：导致反应平衡点反向偏移。 OH- 离子：结合Cd2+离子，也导致反应平衡点反向偏移。 制备不同pH值条件的样品，测量其荧光强度，找到最强荧光样品所对应的pH值。 荧光样品定量分析 配制包括浓度为0的标准样品，测量各标准样对应的荧光强度。作出标准曲线。 测定样品的荧光强度，根据对样品的稀释倍数及标准曲线计算出样品的浓度。 实验操作步骤1：配制试剂 镉离子标准液：20ug/ml 高铁试剂： 0.2% 缓冲液： pH=7 弱酸液（硼酸、醋酸、磷酸）：0.004mol/L 强碱液（NaOH）: 0.02mol/L 测试样品。 配制条件试验样品 配制定量分析试样 荧光分光光度计操作-开机 打开氙灯电源 等待十秒钟后，按启辉按纽点亮氙灯。如果未点亮，则重复此步骤。 打开主机电源，等待主机自动执行启动程序。待两个数字显示窗口显示200时仪器启动就续。 荧光分光光度计操作--设定参数 输入激发光波长与发射光波长。 调节激发光狭缝与发射光狭缝。 设定测定mode---- ratio 输入积分测量时间 1秒。 调节测量零点 -- auto zero 设定显示窗口：由wavelength改为data 荧光分光光度计操作--测定 将约1ml样品加入荧光比色皿中，再把比色皿放进样品架上，盖上盖子，等3秒钟后读数。 数字显示的读数会因为仪器噪声的因素而不停地变化。其幅度很小，因此可忽略之，直接读第三秒显示的数字即可。 样品不可长时间在仪器里被激发光照射。会有荧光猝灭效应，影响测定准确性。 荧光浓度计算 计算标准样浓度。Cstd =标准液浓度 * 加入体积 /试样总体积 在坐标纸上画出标准曲线，横坐标为各标准样的Cstd，纵坐标为荧光强度值。或者计算标准曲线方程。 计算样品稀释倍数。 试样总体积/样品加入体积 求出试样浓度，再乘以稀释倍数，得到样品浓度。 思考题 1.? ?样品pH值为何影响荧光强度？ 2.? 若用分光光度法测定荧光物质，其特征吸收光波长与该物质的最大发射光光长有关吗？与最大激发光波长有关吗？ 3.??若用分光光度法测定荧光物质，其灵敏度会低于荧光法，为什么？ 4.?? 狭缝宽度对测量有什么影响？ 5.???发射光波长总是比激发光波长大，是吗？为什么？ 6.??配制试样时为什么要先加水，然后再加别的试剂？ 7.??强荧光溶液的颜色与观察角度有关，对着阳光观察时，溶液呈现的颜色与激发光波长有关，是什么关系？而在照射光侧面观察溶液的颜色则与发射光波长有关，这又是什么关系？ 8.?在日常生活中有那些现象是荧光物质发光的？ 9.?? 简述荧光现象与磷光现象的区别。 10.?根据标准曲线的数据，估计一下本实验检测溶液中Cd2+离子的检测限。 * * 白色光照射下的荧光 激发光 透射光 荧光 紫外光激发的荧光 激发光 固体表面激发的荧光 荧光 人民币上的荧光防伪标记 Cd 2+ Cd 2H + ? 1 2 3 4 5 6 7 8 20ug/LCd2+ 标准液(mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 Water(mL) 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0