实验四、革兰氏染色.pptVIP

实验四、革兰氏染色、芽孢染色 一、目的要求 1.学习并掌握革兰氏染色法、芽孢染色法、荚膜染色法 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重 要性、芽胞杆菌的形态特征、细菌荚膜的特征 二、实验器材 1.菌种 大肠杆菌（E coli） 枯草芽胞杆菌（ Bacillus subtilis） 巨大芽胞杆菌（Bacillus megatathium） 苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis） 2.染色剂 革兰氏染色液 饱和孔雀绿水溶液 0.5%番红水溶液 墨水 3.仪器及用具 显微镜 酒精灯 载玻片 接种环 双层瓶 擦镜纸 蒸馏水 三、实验步骤 （一）革兰氏染色 1.制片 常规涂片、干燥、固定 2.初染 滴加结晶紫，染色1~2分钟，水洗。 3.媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1分钟，水洗。 4.脱色 吸水纸吸干玻片上的残水，用滴管流加95%的乙醇脱色，直至乙醇无紫色，立即水洗。脱色时间约20~30秒。 5.复染 用番红液复染约2分钟，水洗。 6.镜检 干燥后，用油镜观察 菌体被染成蓝紫色的是革兰氏阳性菌，被染成红色的为革兰氏阴性菌。 （二）芽胞染色 1. 制片 常规涂片、干燥、固定 2.染色 加3~5滴饱和孔雀绿染液于涂片上 ，维持10分钟以上 3.水洗 用缓流自来水冲洗，直至流出的水为无色为止 4.复染 用番红染液复染2分钟 5.水洗 用缓流水冲洗，吸干 6.镜检 干后用油镜观察：芽孢为绿色，芽孢囊及营养体为红色 （三）荚膜染色 湿墨水法 1.制备菌和墨水混合液 加一滴墨水于洁净的载玻片上，然后挑取少量菌体与其混合均匀 2.加盖玻片 加一洁净的盖玻片盖在混合液上，然后在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压以吸去多余的混合液，勿留气泡 3.镜检 用低倍镜和高倍镜观察。 背景灰色，菌体较暗，在菌体周围呈现的明亮透明圈即为荚膜。 * *