柚皮苷对小鼠成骨细胞MC3T3E1增殖功能的影响.docVIP

柚皮苷对小鼠成骨细胞MC3T3E1增殖功能的影响 作者：唐琪 王维倩 王仁飞 丁佩惠 陈莉丽 【摘要】 [目的]检测柚皮苷溶液对成骨细胞株MC3T3E1细胞增殖功能的影响。[方法]以成骨细胞株MC3T3E1细胞为体外药效的试验模型，通过CCK8法观察各种浓度的柚皮苷溶液对MC3T3E1细胞增殖能力的影响。[结果]高浓度的柚皮苷溶液在12h和24h时能促进MC3T3E1细胞的增殖作用。而低浓度的柚皮苷溶液则无此作用。但是48h时各个浓度的柚皮苷溶液均不能促进细胞增殖。所测的各个组别细胞毒性百分比都较小，且随着时间的推移(12h，24h，48h)变化较小。光镜下观察各个时间点细胞的密度和形态也未发生明显的变化。[结论]柚皮苷溶液可以提高成骨细胞株MC3T3E1增殖能力。 【关键词】 柚皮苷;成骨细胞;骨碎补;增殖 　　Abstract：[Objective]To observe the effect of naringin solution on osteoblast line MC3T3E1 proliferation.[Method]Take MC3T3E1 as test model in vitro potency，observe the influence of all concentrations of naringin solutions on MC3T3E1 proliferation with CCK6 method.[Result]High concentration of narigin solution can promote MC3T3E1 proliferation at 12h and 24h;while the low concentration of that has no such action.But at 48h，all concentrations of the solutions can not promote cell proliferation.The tested groups of cell toxin all have small percentage，and have little change with time passing by(12h，24，48h).Under microscope，the cell concentration and shape have no marked change Either.[Conclusion]Narigin solution can improve the osteoblast line MC3T3E1 proliferation ability. 　　Key words：narigin;osteoblast;Rhizoma Drynariae;proliferation 　　骨碎补为骨伤科常用中药，具有补肾强骨、续伤止痛等功效[1]。以往的研究发现，骨碎补水提液和醇提液能促进小鼠成骨细胞株MC3T3E1的增殖、分化和钙化作用;能抑制大鼠实验性牙槽骨吸收[23]。我们在以往研究成果的基础上，综合国内外 文献 ，考虑从骨碎补主要成分之一柚皮苷着手进行药效鉴定，研究其对小鼠成骨细胞株MC3T3E1增殖的影响。 　　 1 材料和方法 　　1.1 细胞株及培养液 小鼠成骨细胞株MC3T3E1为浙江大学医学院病原生物学实验室提供，培养液为含10%(V/V)胎牛血清的αMEM(Gibco)。 　　1.2 实验药品 柚皮苷购自 中国 药品生物制品检定所(批号110722200309)，二甲基亚砜(DMSO)来自Sigma公司。5.805mg柚皮苷溶于1ml二甲基亚砜中，以0.22um过滤膜滤过，终浓度为1×10-2M，作为母液，-70保存。再用10%胎牛血清或者1%胎牛血清的αMEM培养液稀释成以下浓度梯度备用：10UM，1UM，0.1UM，0.01UM，0.001UM，0.0001UM。为了避免二甲基亚砜造成细胞损伤，培养液中其终浓度必须小于等于0.1%。CCK8试剂盒购自上海同仁化学研究所。乳酸脱氢酶细胞毒性试剂盒购自美国罗氏公司。 　　1.3 检测指标 　　1.3.1 细胞增殖效应检测 采用CCK8法检测细胞增殖效应。96孔板中每孔接种1×105/mlMC3T3E1细胞。24h后，更换培养液并添加含10%胎牛血清各柚皮苷溶液100ul，浓度分别为10UM，1UM，0.1UM，0.01UM，0.001UM，0.0001UM。添加等体积含10%胎牛血清培养基作为阴性对照组，同时设立不加细胞的空白对照组。各为6复孔，分别添加12h，24h，48h。到规定的时间点后，各孔加入10ul的CCK8溶液。37敷育2h，测定45