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生长抑素对甲状腺髓样癌细胞影响的实验研究 【关键词】 生长抑素 甲状腺髓样癌 细胞 　　甲状腺髓样癌占甲状腺恶性肿瘤5%～10%，是一种神经内分泌肿瘤，起源于甲状腺滤泡旁细胞，产生降钙素。目前甲状腺癌主要是以手术为主，联合外放疗、I131放射 治疗 等手段进行综合治疗［1］。近年有 文献 报道甲状腺髓样癌表面富含生长抑素受体［2］。本研究观察生长抑制奥曲肽（OCT）对甲状腺髓样癌细胞生长情况的影响，初步研究其作用机制。 1　材料与方法 1.1　试剂及设备　主要试剂包括：RPMI-1640培养基（美国Gibco公司），FBS（美国Hyclone公司），胰蛋白酶、MTT、DMSO、细胞周期检测试剂盒（美国Becton Dickinson公司），OCT（Sandoz公司）；主要设备包括：超净工作台 （苏州净化设备厂生产），CO2培养箱（Type4型，德国Heraeus公司），倒置相差显微镜 （美国Olympus公司），PTC-200PCR仪 （美国MJ公司），FACSCalibur流式细胞仪（美国BD公司）。 1.2　方法 1.2.1　细胞培养　人甲状腺髓样癌细胞株TT细胞（购自 中国 科学 院细胞库）培养于含10% FBS、青霉素100 U/mL、链霉素100 μg/mL的RPMI 1640培养基中，37 、5% CO2条件下常规培养，0.25%胰蛋白酶消化传代。 1.2.2　MTT比色分析法　测定OCT对TT细胞生长的抑制率。取对数生长期的TT细胞，消化后RPMI 1640完全培养基调整细胞悬液浓度为1×108 L-1，接种于96孔板，100 μL/孔。37 、5% CO2条件下常规培养24 h。分组情况：空白组，不加细胞；对照组，不加药；实验组，OCT浓度分别为10-5、10-6和10-7 mol/L，每组4个复孔。继续培养48 h，终止培养前4 h加入MTT 40 μL/孔，MTT终浓度为1 g/L。结束培养时，吸去上清，加入DMSO，酶联检测仪测定吸光度OD值（λ=570 nm）。 计算 细胞生长抑制率：抑制率（%）=[（对照组OD-空白组OD）-（实验组OD-空白组OD）]/（对照组OD-空白组OD）×100%。 1.2.3　流式细胞术测定OCT对细胞周期的影响　TT细胞消化后，以2×108 L-1细胞悬液接种于培养瓶中，每瓶1 mL，同步化后更换无血清培养基。实验组加入OCT，终浓度为10～6 mol/L，对照组加入等量无血清培养基。设3、6、12、24、36和48 h 6个时间点，培养终止后消化制成细胞悬液，1000 r/min离心5 min，加入70%的预冷乙醇，4冰箱过夜。次日PBS洗涤，1000 r/min离心5 min，加入1 mL碘化啶染液，MODFitL T分析软件进行细胞周期分析。 1.2.4　统计学处理　所获数据采用SPSS 15.0统计学软件处理，进行单因素方差分析和t检验，P≤0.05为差异有统计学意义。 2　结果 2.1　OCT对TT细胞增殖的影响　对照组和实验组（10-7、10-6、和10-5 mol/L）的吸光度值分别为0.4395±0.0142、0.5185±0.0200、0.03825±0.0150 和0. 3120±0.0239，实验组10-7、10-6、和10-5 mol/L的抑制率分别为3.82%、15.60%和33.36%。OCT 10-6和10-5 mol/L组均对TT细胞表现出抑制作用（P0.05），并随着药物浓度的增高抑制作用逐渐加强。 2.2　流式细胞仪分析OCT对TT细胞周期的影响　OCT能够诱导TT 细胞 G0/G1期阻滞，加药后12 h开始出现，加药后24 h最显著，同时伴S 期细胞比例减少（表1，表2）。 3　讨论 　　OCT是Gabriel等［3］于1982年合成的一种生长抑素八肽类似物。近年研究发现其与肿瘤的关系密切，表现为在体内抑制多种实体肿瘤的生长［4］。其抗肿瘤机制尚未明确，可能包括:1）通过与特异性的生长抑素受体（somatostatin receptor，SSTR） 的不同亚型结合，介导抗癌效应；2）通过抑制多种生长因子（如生长激素、表皮生长因子等）和抑制肿瘤血管生成，达到抑制肿瘤生长的作用。国外研究显示OCT对消化道肿瘤的抑制可能与OCT与细胞周期素相结合有关［5］。本研究发现OCT体外可以抑制TT细胞生长，诱导TT 细胞 G0/G1期阻滞，同时伴S 期细胞比例减少，具体的作用机制有待进一步研究。 【 参考 文献 】 [1] Messina M, Yu DM, Both GW, et al. Calcitonin-specific transcription and splicing tar