生物制品制造新技术2公开课.pptVIP

第二节、生物技术诊断制剂 重组表达抗原(Recombinant antigen) 核酸图谱分析(Atlas of Nucleic Acid) 核酸探针(Nucleic acid probe) 聚合酶链反应(PCR) 基因芯片(Gene chip) 一、重组表达抗原 基因工程重组表达抗原是用DNA重组技术，将编码特定抗原的基因插入原核或真核表达质粒，再转入宿主中使其高效表达，然后运用生物化学分离、纯化技术，提取表达产物等，最终制成诊断用重组表达抗原。 二、核酸图谱分析 核酸电泳图谱 核酸酶切图谱 寡核苷酸指纹图谱 （一）核酸电泳图谱分析 1、质粒图谱分析 2、RNA电泳图谱分析 (二) 核酸酶切图谱分析 （三）寡核苷酸指纹图谱分析 三、核酸探针 聚合酶链式反应（PCR） 五、基因芯片（Gene chip） DNA芯片技术的应用领域 第三节、抗体工程技术 单克隆抗体 基因工程抗体 催化抗体 一、单克隆抗体 杂交瘤技术制备单抗 （四）单克隆抗体的应用 二、基因工程抗体 用基因工程技术制备抗体分子，这种抗体分子称为基因工程抗体（genetic engineering antibody）。 嵌合抗体（chimeric antibody） 重构抗体（reshaping antibody） 单链抗体（single-chain antibody） Ig相关分子 噬菌体抗体（phage antibody） 全套抗体（the immunoglobulin repertoire）基因库 嵌合抗体（chimeric antibody） 嵌合抗体是指在同一抗体分子种含有不同种属来源抗体片段的抗体，又称杂种抗体。 “鼠－人”型 重构抗体（reshaping antibody） 在嵌合抗体的基础上，进一步将鼠Ab超变区基因嵌入人抗体Fab骨架区的编码基因中，再将此DNA片段与人Ig恒定区基因相连，然后转染杂交瘤细胞，使之表达嵌合的V区抗体。 单链抗体（single-chain antibody） 单链抗体(ScFv)是由VH和VL通过连接肽（接头）重组并表达而成的另外一种小分子抗体。 具有较好的抗原结合能力，且分子量小、穿透力强、体内循环半衰期短及免疫原性低等特性。 在此基础上，可与其他效应分子构建成多种具有新功能的抗体分子，是构建免疫毒素和双特异抗体等的理想而基本的元件 。 Ig相关分子 将抗体分子的部分片段（如V区或C区）连接到与抗体无关的序列上（如毒素），就可创造一些Ig相关分子。 “生物导弹”，毒素取代Fc,通过高变区结合特异抗原，连接上的毒素可直接运送到靶细胞表面 噬菌体抗体（phage antibody） 通过PCR将全套人抗体重链和轻链V区基因克隆出来，并在噬菌体表面表达、分泌，经筛选后获得特异性抗体。 噬菌体表面展示技术（phage display technology） 全套抗体（the immunoglobulin repertoire）基因库 将全套抗体基因库中的VH基因与有限数目的VL基因排列组合构建Ig，从中可筛选出有催化作用的抗体。 Ig与抗原结合的作用主要来自重链 三 、催化抗体(catalytic antibody) 也称抗体酶(abzyme),是具有催化活性的免疫球蛋白，具有抗体的高度选择性和酶的高效催化性。 （二）催化抗体的制备 1、细胞融合法：用设计好的半抗原，通过间隔链与载体蛋白（如牛血清白蛋白）偶联制成抗原。（反应物的过渡态类似物） 以此抗原制备相应的单抗即得抗体酶 2、抗体结合位点化学修饰法： 在抗体结合位置或附近引入具有催化功能的基因。 游离巯基（-SH），它具有高亲核性，易于氧化，及能通过二硫化物进行交换反应或亲电反应而选择性修饰的特点 3 . 引入辅助因子法 酶活性中心 金属离子 将金属离子引入抗体酶，催化肽键的选择性水解 三乙撑胺Co3+盐作为金属离子辅因子，所用半抗原分子带有一肽键。且通过羧根及仲胺基与金属离子相连。将此半抗原通过共价键连接在载体蛋白免疫动物产生的抗体，在金属离子复合物作为辅因子的参与下，这些抗体酶能选择性水解甘氨酸和丙氨酸之间的肽键 . 4、用生物工程的方法产生抗体 Fab片断由轻链和重链的VH及CH1部分组成，作为一种催化剂，抗体酶有这样的片断就行，无须完整的抗体分子。 通过噬菌体展示技术或全套抗体基因库筛选高效催化抗体。 （三）催化抗体的应用 1、酶作用机理研究及制药、化工合成及分析测试等 2、生物医学领域 抗体酶切割蛋白质和核酸 水解病毒蛋白质的抗体酶 肿瘤治疗 （ADEPT技术） 3、戒毒方面的应用 阻断可卡因、鸦片和受体的结