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第九章 临床微生物学检验 第一节 临床常用的微生物检查方法 一、病原体的检测方法 直接镜检：观察病原体形态最常用的方法。有盐水涂片、染色镜检两种。 分离培养：是诊断感染性疾病的金标准方法。 核酸检测：分子生物学 血清学检测：免疫学 （一）直接镜检 1、悬滴法/压滴法： 细菌的动力，如变性杆菌具有周鞭毛，动力活泼；霍乱弧菌单鞭毛，穿梭样运动。 螺旋体的形态，主要在暗视野 显微镜和相差显微镜下观察，如一期梅毒时从破损粘膜处可检出梅毒螺旋体。普通显微镜下观察滴虫等。 2、染色镜检：常用的检测方法有以下几种. 革兰氏染色：G+紫色，G-红色。 抗酸染色：抗酸杆菌红色，包括结核杆菌和非结核分枝杆菌。 墨汁染色：主要检查CSF中的新型隐球菌。 其它染色：如银染，金染等主要用于细菌、真菌和寄生虫检查。 （二）分离培养 1、无生命培养基：主要用于细菌、真菌、支原体等。病原体自身拥有完整营养体系。 2、生命培养基：主要用于衣原体、病毒等。病原体缺乏能量与营养系统，需依赖其他生命体。 （三）免疫学方法检测：通常标本为血清。 1、检验方法多样：ELISA、RIA、免疫荧光等 2、检测病原体种类范围广：细菌、病毒、寄生虫、支、衣原体等。 （四）分子生物学检测 1、优点：敏感性高，直接测定病原体的遗传物质 2、方法：PCR、核酸探针杂交技术 第二节.标本采集与运送： 总原则 ： 应用抗生素之前采集，采集病变部位比如粪便要采集脓血部位，防止污染，避免正常菌群对致病菌的污染，有些细菌不耐冷，厌氧菌及时送检，标本应盛于无菌、干燥、 有盖的容器内 ，透明盒身，要可以看到标本性状。 （一）血液标本采集 1、采集方法：严格无菌操作，正确消毒皮肤，采集后立即注入培养瓶中充分混匀，以防凝固。同时做需氧、厌氧培养时，先将血液注入厌氧瓶，注意排尽针筒前气泡。 2、采集时间：血样一般应在抗菌素治疗前、患者寒颤初起或高热时采集。伤寒发热一周内采样；化脓性脑膜炎发热1-2日内采样；亚急性细菌心内膜炎应多部位、多时间段采样。 3、采集部位：一般为手臂静脉，也可自感染灶周围静脉采血，亚急性细菌心内膜炎患者可从股动脉等处采血。 4、采集量：儿童 3-5ml，成人5-10ml。骨髓1-2ml 。 （二）呼吸道标本痰液、气管分泌物标本采集 1、采集时间：清晨采集最佳。患者清水漱口后，用力自气管深部咳出痰液于无菌杯中，加盖送检。切勿污染唾液和鼻咽部分泌物。 2、气管切开的患者，应在更换新气管套管后自管内取标本。 3、肺结核患者结核分枝杆菌检查应采集较多的痰液，若痰量少，应采集24小时痰液以提高阳性率。 4、支气管分泌物,肺泡灌洗液由专业医师采集 5、肺脓肿患者厌氧培养时，可直接在环甲膜下穿刺抽取分泌物，排去空气后，插入无菌的橡皮塞送检。也可用专用厌氧培养运送管 （三）尿液标本采集 1、中段尿：最常用的方法。晨起第一次中段尿液,中段应为连续尿液的中段尿。 （1）成年女性：外阴部先以肥皂水清洗，再以灭菌水或1：1000高锰酸钾水溶液冲洗尿道口，然后排尿弃前段尿，留取中段尿5-10ml于无菌容器内。必须引起注意的是要直接留于无菌容器内，不能将便盆或尿袋中标本倒入无菌容器中送检。 （2）成年男性：先以肥皂水清洗尿道口，再用清水冲洗，就可采集中段尿。 （3）婴幼儿：消毒外阴部或外生殖器，无菌尿杯对准尿道口留取。 2、留置导尿的尿液应用注射器从尿袋近尿道端吸取5ml，切不可直接从尿袋底部出口留取。 3、厌氧培养时采用耻骨上膀胱穿刺术取尿液。 4、抗酸杆菌染色检查，为提高检出率，可留取24小时尿液,然后取部分沉淀送检. （四）咽拭子、口腔拭子的送检 1、病人清水漱口后，由医师采样。用压舌板尽可能将悬幽垂向外牵引，棉拭子越过舌根到咽后壁或悬幽垂的后侧，反复擦拭数次，插入运送培养基。棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液。 2、对化脓性扁桃体炎或口腔念珠菌病，用棉拭子在病灶部位擦拭数次即可。 （五）粪便标本采集 1、采集时间最好在急性腹泻期,未用抗生素前。 2、标本应新鲜,采取粘液,脓血部位或絮状物1- 2ml；成形粪便采取蚕豆大小。 3、婴幼儿或无大便者可用直肠拭子采取:无菌棉签用生理盐水湿润后插入肛门4-5cm处转动取出于无菌试管中送检。 （六）创伤口分泌液,脓液标本采集 1、自创面,感染面采集标本时,应先用无菌生理盐水清洗表面,在以无菌棉签采取深部分泌物,(坏死组织与正常组织相接部位)。 2、脓肿可用注射器吸取脓液,如量少,也可用无菌棉签采集。 3、厌氧培养应用针管抽取深部脓液，排出空气，针尖插入无菌橡皮塞中送检。 （七）脑脊液标本采集 1、脑脊液可采自腰椎，小脑延池，脑室采集。 2、标本量最少１ml一定要立刻送检,冬季应注意保温。因为化脑的病原体常为嗜血杆菌、脑膜炎双球菌、