第六章分子生物学基本研究法下-基因功能研究技术.pptVIP

第六章 分子生物学基本研究法（下）—基因功能研究技术 6. 3 蛋白质及RNA相互作用技术 6. 3. 1 酵母单杂交系统（Yeast one-hybrid system） 是上世纪90年代中发展起来的研究DNA-蛋白质之间相互作用的新技术，可识别稳定结合于DNA上的蛋白质，在酵母细胞内研究真核生物中DNA-蛋白质之间的相互作用，并通过筛选DNA文库直接获得靶序列相互作用蛋白的编码基因。 将已知顺式作用元件构建到最基本启动子（minimal promoter，Pmin）的上游，把报告基因连接到Pmin下游。 将编码待测转录因子cDNA与已知酵母转录激活结构域（transcription-activating domain, AD） 融合表达载体导入酵母细胞，该基因产物如果能够与顺式作用元件相结合，就能激活 Pmin启动子，使报告基因得到表达。 转录因子与顺式作用元件结合，激活最基本启动子Pmin，使报告基因表达。若接入3个以上顺式作用元件，可增强转录因子的识别和结合效率。 上游 下游 结构域 启动子 二者融合导入酵母细胞 * * 基因表达研究技术 基因敲除技术 蛋白质及RNA相互作用技术 基因芯片及数据分析 利用酵母鉴定靶基因功能 其他分子生物学技术 6.1 基因表达研究技术 6. 1. 1 基因表达系列分析技术（Serial Analysis of Gene Expressio