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生物秀实验频道——生命科学实验中心 /bio101 核酸的琼脂糖凝胶电泳 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs 生物秀实验频道——生命科学实验中心 /bio101 一、琼脂糖凝胶电泳的功用 琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片 段的标准方法。该技术操作简便快速，可以分 辨用其它方法（如密度梯度离心法）所无法分 离的DNA片段。当用低浓度的荧光嵌入染料溴 化乙啶(Ethidium bromide, EB)染色,在紫外光 下至少可以检出1-10ng的DNA条带,从而可以确 定DNA片段在凝胶中的位置。此外,还可以从电 泳后的凝胶中回收特定的DNA条带,用于以后的 克隆操作。 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs 生物秀实验频道——生命科学实验中心 /bio101 二、实验原理： 在pH 值为8.0～8.3 时，核酸分子碱基几 不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电，在电 泳时向正极移动。采用适当浓度的凝胶介质作为 电泳支持物，在分子筛的作用下，使分子大小和 构象不同的核酸分子泳动率出现较大的差异，从 而达到分离核酸片段检测其大小的目的。核酸分 子中嵌入荧光染料（如EB ）后，在紫外灯下可 观察到核酸片段所在的位置。 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs 生物秀实验频道——生命科学实验中心 /bio101 三、琼脂糖电泳分离DNA 的范围 琼脂糖可以形成各种形状、大小的孔隙度。 琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广,不同浓度 琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA 片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定 的电场下电泳。 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区 /bbs 生物秀实验频道——生命科学实验中心 /bio101 四、电泳指示剂： 核酸电泳常用的指示剂有两种，溴酚蓝 （bromophenol blue, Bb ）呈蓝紫色；二甲苯晴 （xylene cyanol, Xc ）呈蓝色，它携带的电荷 量比溴酚蓝少，在凝胶中的迁移率比溴酚蓝 慢。 胶浓（%） 溴酚蓝 二甲苯青 0.6 1kb 1 0.6kb 2kb 1.4 0.2kb 1.6kb 2 0.15kb 生物秀论坛——学术交流、资源共享、互助社区