基因工程的基本操作程序zl.pptVIP

(一)从基因文库中获取目的基因 (一)从基因文库中获取目的基因 PCR技术—多聚酶链式反应 原理： 前提： 条件： 3.哪项不是基因表达载体的组成部分 A.启动子 B.终止密码子 C.标记基因 D.目的基因 4.下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法 A．基因枪法 B．显微注射法 C.农杆菌转化法 D．花粉管通道法 PCR(多聚酶链式反应) 知识延伸——DNA分子杂交技术 标记 待检测 1.比较载体与基因表达载体的区别。 2.切割DNA获取目的基因和切割载体时一般情况下为什么 要选用同一种限制性核酸内切酶？经过重组过程后会形 成几种DNA分子？ 3.分析为什么动物的受体细胞不能为体细胞？ 4.讨论大肠杆菌细胞转化时为什么要用Ca2+处理细胞。 5.目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内稳定保存的实 质是什么？ 6.基因探针的实质是什么？ 7.若使农杆菌也能感染单子叶植物，应如何操作？ 8.基因工程操作的四个步骤中，有哪几个步骤涉及到碱基 互补配对？ 小结: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法、显微注射技术、感受态细胞 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定 1.细菌的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是 A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B．有利于对目的基因是否导入进行检测 C．增加质粒分子的分子量 D．便于与外源基因连接 2. 有关基因工程的叙述正确的是 A．限制酶只在获得目的基因时才用 B．重组质粒的形成是在细胞内完成的 C．质粒都可作为运载体 D．蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料 B D B B 5、有关基因工程的叙述中，错误的是 A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶 A 6.将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是 A.每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B.每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C.每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D.每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 C 7.农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染植物，因而在植物基因工程中得到了广泛的应用。下图为农杆菌转化法的示意图，试回答下列问题： (1)一般情况下农杆菌不能感染的植物是____，利用农杆菌能在自然条件下感染植物的特点，能实现__________。具体原理是在农杆菌的Ti质粒上存在T-DNA片段，它具有可转移到受体细胞并整合到受体细胞的____上的特点，因此只要将携带外源基因的DNA片段插入到____(部位)即可。 (2)根据T-DNA这一转移特点，猜测该DNA片段上可能含有控制_____________________ (酶)合成的基因。 (3)图中c过程中，能促进农杆菌移向植物细胞的物质是__ ___________类化合物。 (4)植物基因工程中将目的基因导入受体细胞的方法除了农杆菌转化法之外，还可采取________________。(至少写出两种) 单子叶植物 目的基因导入到植物细胞 染色体DNA T-DNA片段(内部) DNA连接酶、限制酶 酚 基因枪法、花粉管通道法 1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 三、将目的基因导入受体细胞 花粉管通道法 1、将目的基因导入植物细胞的方法： 三、将目的基因导入受体细胞 基因枪法 2、将目的基因导入动物细胞 显微注射法 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射受精卵 移植到输卵管或子宫 新性状动物 3、将目的基因导入微生物细胞 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 处理物质： 常用菌： 微生物作受体细胞原因： Ca2+处理 大肠杆菌 繁殖快、 多为单细胞、 遗传物质相对少 过程： 思考与探究： 2.根据农杆菌可将目的基因导入双子叶植物的机理,你能分析出不能导入单子叶植物的原因吗?若将一个抗病基因导入小麦中,理论上讲你应该怎样做? ①要选择合适的农杆菌菌株，因为不是所有的农杆菌菌株都可以侵染单子叶植物；②