生物化学第二章核酸的结构和功能.pptVIP

二、DNA的变性 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 定义: DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。 协同性的DNA解链 高温或极端的pH DNA的变性: 部分变性DNA的电镜图像: 增色效应：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化: DNA的解链曲线: 加热解链过程中，紫外吸光度达到最大值的一半时所对应的温度。 解链温度 (Tm) G+C 含量越高，解链温度就越高。 解链曲线的变化: 三、变性核酸的复性及分子杂交 1、当变性条件缓慢地除去后，两条解离的互补链可重新配对，恢复原来的双螺旋结构，这一现象称为DNA复性(renaturation) 。 3、减色效应：DNA复性时，其溶液OD260降低。 2、热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，这一过程称为退火(annealing) 。 （一）变性核酸的复性 不同种类的DNA(RNA)单链放在同一溶液中，在适宜的条件可以在不同的分子间形成杂化双链(heteroduplex)，这种现象称为核酸分子杂交。 这种杂化双链可以在不同的DNA之间形成，也可以在DNA和RNA间或RNA与RNA之间形成。 （二）核酸分子杂交(hybridization) 核酸分子杂交: 研究DNA分子中某一种基因的位置。 监定两种核酸分子间的序列相似性。 检测某些专一序列在待检样品中存在与否。 核酸分子杂交的应用: 依据底物不同分类 DNA酶(deoxyribonuclease, DNase)： 专一降解DNA。 RNA酶 (ribonuclease, RNase)： 专一降解RNA。 依据切割部位不同 核酸内切酶：限制性内切酶和非限制性内切酶。 核酸外切酶：5′→3′或3′→5′核酸外切酶。 核酸酶是指所有可以水解核酸的酶。 第五节 核酸酶（Nuclease） 5’ 5’ 3’ 3’ 外切位点 外切位点 内切位点 内切位点 1、参与DNA的合成、修复以及RNA的剪接。 2、清除多余的结构和功能异常的核酸，以及侵入细胞的外源性核酸。 3、降解食物中的核酸。 4、体外重组DNA技术中的重要工具酶 。 核酸酶的功能: * * * * The forces stabilizing the DNA double helix can be overcome by heating the DNA in solution or by treating it with very high or very low pH (low pH will also damage the DNA, whereas high pH will simply separate the polynucleotide chains). When the strands of DNA separate, the DNA is said to be denatured (when high temperature is used to denature DNA, the DNA is said to be melted). Because some of the forces stabilizing the DNA double helix are contributed by base pairing interactions, and because A-T base pairs have only two hydrogen bonds in contrast to G-C base pairs which have three hydrogen bonds, regions of the DNA duplex that are A-T rich will denature first. Once denaturation has begun, there is a cooperative unwinding of the double helix that ultimately results in complete strand separation. * Deoxyribonucleases (or DNases) are enzymes that cleave phosphodiester bonds. Some are used for constructive purposes, such as proofreading during DNA replication, whereas others are used to degrade DNA. There are two basic class