第3章动物细胞工程制药二.pptVIP

第六节 动物细胞大量培养的方法和操作方式;动物细胞的大规模培养主要可分为悬浮培养、贴壁培养和贴壁—悬浮培养。 悬浮培养（suspension culture)：让细胞自由地悬浮于培养基内生长增殖。 它适用于一切种类的非贴壁依赖性细胞（悬浮细胞），也适用于兼性贴壁细胞。 ◆优点：操作简便，培养条件比较均一，传质和传氧较好，容易扩大培养规模，可借鉴许多有关细菌发酵的经验。 ◆不足：较难采用灌流培养，细胞密度一般较低。 目前在生产中用于悬浮培养的设备主要是通气搅拌罐生物反应器和气升式生物反应器。;;悬浮培养;贴壁培养（anchorage-dependent culture）是必须让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。 它适用于一切贴附依赖性细胞（贴壁细胞），也适用于兼性贴壁细胞。 ◆优点：适用的细胞种类广，较容易采用灌流培养的方式使细胞达到高密度； ◆不足：操作比较麻烦，需要适合的贴附材料和足够的面积，培养条件不易均一，传质和传氧较差。  目前应用较多的贴壁培养方法有：转瓶培养法、固定床式生物反应器等。 贴壁培养在传代或扩大培养时常常需要用酶将细胞从基质上消化下来，分离成单个细胞再进行培养。;细胞转瓶培养器 （贴壁培养）; 贴壁—悬浮培养（假悬浮培养） 将悬浮培养和贴壁培养二者结合起来，优势互补，形成的一种更理想、更适于工业化大规模生产的培养方法。 （1）微载体培养（microcarier culture) （2）包埋和微囊培养 （3）结团培养;（1）微载体培养;显微镜下的微载体;;;理想的微载体需具备的一些条件： 微载体表面性质与细胞有良好的相容性，适于细胞附着、伸展和增殖。 微载体的材料无毒性。 微载体的材料是惰性的。 微载体的比重为1.030～1.045g/ml，在低速搅拌下就可悬浮，而在静止时又可很快沉降，便于换液和收获。 粒径在60 ～250μm之间，并要尽可能地均一，有利于细胞均匀地分布于其表面。 具有良好的光学透明性，适于在倒置显微镜下观察。 基质的性质最好是软性的，避免在搅拌中由于载体互相摩擦而损伤细胞 可耐120℃高温，便于采用高压蒸汽灭菌 经简单的适当处理后，可反复使用。 原料充分，制作简便，价廉。;（2）包埋和微囊培养;包埋或微囊培养法的优点是： 细胞可获得保护，避免了剪切力的损害。 可以获得较高的细胞密度，一般都在107～108个/ml以上。 当控制微囊膜的孔径后，可使产品浓宿在微囊内，从而有利于下游产物的纯化。 可采用多种生物反应器进行大规模培养：搅拌罐式生物反应器、气升式反应器、固定床式生物反应器等等。;（3）结团培养;动物细胞固定化各种方法的特点;第六节 动物细胞大量培养的方法和操作方式二、动物细胞培养的操作方式;1．分批式操作;2.半连续式操作;3.灌流式操作;灌流式操作在某些生物反应器是唯一可行的操作方式，如中空纤维生物反应器、固定床或流化床反应器、膜式生物反应器等。 但在微载体培养、悬浮培养和结团培养中进行灌流式操作，就存在一个使条件培养基和细胞、载体分离的问题。——滤网、中空纤维分离、超声波分离器、排液柱、专用离心机等;第七节 动物细胞生物反应器;随着动物细胞大量培养技术的发展，新型的生物反应器正在不断出现。 搅拌罐式生物反应器 气升式生物反应器 中空纤维式生物反应器 透析袋或膜式生物反应器 固定床或流化床式生物反应器 其它新开发的生物反应器。 ;1.搅拌罐式生物反应器;搅拌式细胞培养反应器;2.气升式生物反应器;气升式生物反应器;3.中空纤维生物反应器;中空纤维管;;;优点：占地空间小，产品产量、质量高，生产成本低。 不足：①不能重复使用。②不能耐高压蒸汽灭菌，需用环氧乙烷或其他消毒剂灭菌。③难以取样检测。 平床式中空纤维生物反应器的核心是中空纤维反应室。;4.透析袋或膜式生物反应器;膜生物反应器;膜生物反应器膜片;中空纤维膜细胞培养系统;5.固定床或流化床式生物反应器;;巨载体反应系统;比欧P型中试生物反应器;检测参数的全面性和控制系统的精确性反映了生物反应器的水平。 培养过程中需检测的物化参数可直接在线经传感器检出的：温度、pH、搅拌速度、溶氧等；需要取样离线检测的：活细胞数、氨基酸浓度分析、葡萄糖、乳酸和氨离子的测定；检测后需计算才能获得的：细胞的群体倍增时间、细胞的比增长率、葡萄糖消耗率、乳酸产率、生物反应器生产率等。;主要参数的检测和控制方法 （1）温度（电阻温度计） （2）pH（复合式参比电极） （3）溶氧（极谱式或电流式覆膜电极）为保持所需的溶氧，目前常采用的措施（P115） （4）搅拌（电磁感应的转速计） （5）进出液流量（泵速的控制） （6）其他;