第7章rna遗传.pptVIP

Johnston等的工作证明，某种RNA分子确实能够催化RNA复制中的多聚化。 应用NTP及RNA模板的编码信息，使RNA引物持续增加14个核苷酸长度，等于RNA螺旋一圈。这种多聚化是RNA模板依赖的，是按照引物的序列、长度，以及RNA模板的信息进行的。证明了引物的3′是在与RNA模板逐一地、严格地配对的情况下进行的。 RNAi的分子遗传机制 基因mut-7及rde-2如果发生突变则导致内源转座子在生殖细胞中动员，称之为増变现象。说明RNAi过程是造成转位子抑制的原因。 如果基因rde-1和rde-4发生突变，则对线虫注射dsRNA后缺乏产生RNAi的响应，在生殖细胞中也不能动员转位子。 siRNA与靶mRNA的稳定化与“可迁移效应”的结合就形成了一个“连式反应”，在这个反应中，随着Dicer的作用，primer siRNA的更新，以及新的一轮扩增，将发生siRNA的多轮的复制。 应该注意到，这种复制或扩增并不是自我复制/扩增，而是从primerA产生primerB, primerC, primerD,…这是从一个局部延伸为全体，再从全体裂解为若干局部的过程。 将dsRNA注射到线虫两性体，在子一代（F1）产生的基因沉默（RNAi）往往在F2消失。但是，在母性生殖系中，由RNAi引起的基因抑制，可以偶尔地遗传到 F2及以后各代中（图7.8）。 Grishok等证明，如果RNAi在母体启动，它可以通过F1的精子传到F2，尽管该精子缺乏RNAi的靶基因。所以，RNAi一旦启动，即使在缺乏内源靶基因的情况下,雄性生殖系细胞能够传递RNAi 。 因此，RNAi性状是后生的，可遗传的。它并不需要通过基因序列的改变----突变。 已经发现果蝇组蛋白乙酰酶MOF的色结构域起着RNA相互作用模块作用。MOF的例子使人们想到，引导RNA不仅能进行RNA指导的DNA甲基化，也能对基因组的特异区域进行非甲基化的染色质修饰。 哺乳类及果蝇的X染色体的剂量补偿，某些哺乳类基因组记忆，包括非编码RNA、重叠及反义RNA等，都可能是染色质修饰或甲基化现象。 1985年，在动物线粒体中发现一些RNA的polyA尾巴中有终止密码。众所周知，polyA是在转录后才加上去的，与DNA模板根本谈不上对应关系，也绝不会有编码序列。然而出现的这个终止密码却偏偏是64个密码之一，好在这个密码在polyA之内，RNA编码的格局未被破坏。 在病毒、原生动物、哺乳动物及植物的RNA中都发现有U，A，C，G的删除、插入与替换，这种转录后的修饰过程，称为RNA编辑（RNA editing）。（表7.2） PTGS/RNAi产生的机制可分二步： 第一步 是dsRNA内切酶的作用，把sRNA加工成21~25 nt 的有义和反义的RNA(siRNA)，这些siRNA首先在植物中发现。在果蝇中，它们是由一种称为Dicer的RNaseⅢ所产生。Dicer已在线虫、S.pombe及哺乳动物中发现，它含有螺旋酶（helicase）,dsRNA结合域，及PAZ结构域。 第二步 因Dicer所产生的siRNA引导RISC裂解同源的单链mRNAs。 RISC恰在反义siRNA与mRNA结合区域的中间切割mRNA,使mRNA进一步降解。 虽然RISC的大多数蛋白成分还不清楚，但已知到它含有内切酶、外切酶、螺旋酶及同源搜索活性。 RISC的成分是PAZ/Piwi蛋白。通过PAZ域与Dicer作用把siRNA吸收到RISC中。 评论：PTGS/RNAi现象的本质是不能正确地表达基因产物对基因的反馈调控。既然该基因已不能表达信息，就应该使其沉默。这种沉默不是DNA本身的突变，而是后生的基因沉默。这种后生的DNA甲基化是遗传的。这是一种对基因表达环境的一种可遗传的适应。 7.3.3 RNAi引导的同源DNA修饰 RNA引导的同源DNA序列的胞嘧啶的从头甲基化是首次在类病毒感染转基因植物中发现的。继之，又在非病原的植物系统中发现。 RNA指导的DNA甲基化如同降解同源RNA一样，需要把dsRNA裂解为小RNA。只有与引导RNA互补的DNA序列才能够被甲基化，说明这是一个RNA-DNA相互作用的过程。 最短30bp 的DNA序列可以作为甲基化的靶序列；甲基化可以发生于所有的胞嘧啶上，包括那些不存在对称的CpG岛；任何DNA序列，包括那些并不转录的启动子序列，均可被甲基化。那些含有启动子序列的dsRNAs自然可以指导同源的启动子的甲基化及转录沉默 此外，作为PTGS效应而在细胞质中产生的RNAs也可以进入细胞核而触发同源DNA的甲基化。（图7.9，7.11） RNA引导