第1课时基因工程的基本工具.pptVIP

活动1： 体验基因文库的构建过程 PCR扩增过程中设置三种温度的作用分别是什么？ PCR扩增与细胞内DNA复制的比较 1.构建基因表达载体目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用 。 启动子、终止子以及起始密码子、终止密码子所存在的位置及作用？ 活动2： 体验基因表达载体的构建过程 将同一种限制酶切割的质粒与目的基因片段混合，加入DNA连接酶，两两连接的产物有几种？ （1）内容： ①检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因（关键） ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 （2）常用的技术： ①DNA分子杂交技术－－DNA与DNA杂交 ②分子杂交技术－－DNA与RNA杂交 ③蛋白质分子（抗原－抗体）间的杂交 实验3 DNA的粗提取和鉴定 复习要求 1．了解DNA的物理化学性质，DNA的溶解性。 2．二苯胺法鉴定DNA的方法和原理。 3．说明实验原理；明确每一步操作的道理；能够设计实验装置；学会控制实验条件；分析和评价实验方案、实验装置、实验成败的原因 一、提取DNA的方法原理 1、DNA粗提取的基本思路：就是要利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学方面的差异，提取DNA，去除其他成分。 2、DNA的理化性质 （1）DNA的溶解性 ①在NaCl溶液中： DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同：由曲线可以看出，DNA在浓度为_______mol/L的NaCl溶液中溶解度最小。 ②DNA 酒精，而细胞中的某些蛋白质则溶于该溶液，可以利用这一原理对DNA与蛋白质进一步分离。 二、实验设计与操作 （二）去除滤液中的杂质 （4）滤取含DNA的粘稠物：用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在 。 有害的病原微生物;③增加目标害虫的抗性和进化 速度;④转基因植物通过传粉进行基因转移,导致 超级杂草出现;⑤转基因植物的花粉如含有有毒蛋 白或过敏蛋白,通过蜜蜂的采集,很可能进入蜜蜂 中,再经过食物链的传递,最后有可能进入其他动 物和人体内。 （2）DNA的鉴定：在___________条件下，DNA遇__________会被染成 。 4.基因表达载体的组成： 目的基因+启动子+终止子+标记基因 所有生物的DNA的基本结构相同（不同生物DNA都是由4种脱氧核苷酸构成，都具有双螺旋结构，都遵循A-T、G-C的碱基配对原则） 3.不同生物的DNA可以拼接在一起的原因： ?启动子、终止子存在于DNA上； 起始密码子、终止密码子存在于mRNA上。 ?启动子并不是转录的起点，是RNA聚合 酶识别和结合的位点; 起始密码子是翻译的起点。 （08年江苏高考）将动物致病菌的抗原基因导入马铃薯制成植物疫苗，饲喂转基因马铃薯可使动物获得免疫力。以下是与植物疫苗制备过程相关的图和表。 注意基因克隆载体与基因表达载体的区别 载体(vector）： 用于承载、克隆、转移目的基因(DNA片段)，能自我复制的DNA分子。 （1）在基因克隆时：将目的片段转移到宿主细胞中进行复制克隆——克隆载体； （2）在基因导入受体时：将目的片段转移到受体细胞中使目的片段稳定存在并表达——表达载体。 目的基因 启动子和终止子 复制原点 标记基因 多种单一限制酶切点 合适大小 DNA片段 复制原点 标记基因 多种单一限制酶切点 合适大小 下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图（示部分基因及部分限制性内切酶作用位点），思考回答： √ × √ √ × √ √ √ ①人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入____________。 ②人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的 （基因），保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于___________。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。 ③若用限制酶Ⅰ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是