第一章dna与染色体的结构.pptVIP

第一节 DNA结构的多态性与动态性 一、一级结构 指DNA的共价结构和核苷酸顺序，就是4种核苷酸的连接及其排列顺序。 即：DNA的化学组成。 核苷酸链： 基本单位 核甘酸(nucleotide) 两个核甘酸之间由 3′，5′-磷酸二酯键相连。 此外，核酸分子中还发现数十种修饰碱基，又称稀有碱基。 它是指上述五种碱基环上的某一位置被一些化学基团（如甲基化、甲硫基化等）修饰后的衍生物。 一般这些碱基在核酸中的含量稀少， 在各种类型核酸中的分布也不均一。 如DNA中的修饰碱基主要见于噬菌体DNA， RNA中以tRNA含修饰碱基最多。 SSR(Simple Sequence Repeats)标记， 微卫DNA， 是一类由几个核苷酸(一般为1~6个)为重复单位 组成的长达几十个核苷酸的串联重复序列。 由于每个SSR两侧的序列一般是相对保守的单拷贝序列。 长度一般在200bp以下。 DNA结构的多态性 存在多种结构参数不同的DNA双螺旋结构的现象。 原因 多核苷酸链的骨架含有许多可转动的单键， 如磷酸二酯键的两个P-O键、糖苷键、戊糖环各个键。 超螺旋的形成 DNA双螺旋结构中， 一般每转一圈有10个核苷酸对， 平时双螺旋总处于能量最低状态。 若正常DNA双螺旋额外地多转或少转几圈， 使每一圈的核苷酸数目大于或小于10， 就会出现双螺旋空间结构的改变， 在DNA分子中产生额外张力。 若此时双螺旋的末端是固定的或是环状分子， 双链不能自由转动，额外的张力不能释放， 导致DNA分子内部原子空位置的重排，造成扭曲， 出现超螺旋。 1. 条件 加热, 极端pH, 有机溶剂（ 尿素、 酰胺 )， 低盐浓度等。 2. 变性过程的表现 是一个爆发式的协同过程， 变性作用发生在一个很窄的温度范围。 导致一些理化性质发生剧烈变化。 其它影响因素 均一性 核酸分子越长，Tm值越大； 序列均匀，变性同步性较好，解链温度范围较窄。 离子强度 离子强度较低时，Tm值较低，融点范围也较宽， 因此DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中。 pH 小于4或大于11， 不利于碱基氢键形成。 组蛋白一组进化上非常保守的碱性蛋白质，其中碱性氨基酸(精氨酸 Arg，赖氨酸Lys)约占25%，真核生物组蛋白，分为5种类型(H1，H2A，H2B，H3，H4)，后4种各2个形成组蛋白八聚体，构成核小体的核心，占核小体质量的一半。 核小体（nucliesome） 1条染色体有1个DNA分子。 DNA双螺旋 依次在每个组蛋白8聚体分子的表面盘绕约1.75圈， 其长度相当于140个碱基对。 组蛋白8聚体与其表面上盘绕的DNA分子共同构成核小体。 相邻2个核小体间，有长约50～60个碱基对的DNA连接线， 其结合着一个第5种组蛋白（H1）的分子。 密集成串的核小体形成了核质中的100埃左右的纤维， 这就是染色体的“一级结构”。 在这里，DNA分子大约被压缩了7倍。 染色体的高级结构 10nm的核丝（nucleofilament） 染色体的一级结构经螺旋化形成中空的线状体， 称为螺线体或核丝，这是染色体的“二级结构”， 其外径约300埃，内径100埃，相邻螺旋间距为110埃。 螺线体的每一周螺旋包括6个核小体， 因此DNA的长度在这个等级上 又被再压缩了6倍。 30nm 螺旋管（solenoid） 核丝怎样形成更高级的结构呢？ 1976年Finch和Klug提出的螺旋管（solenoid）模型。 10nm的染色质纤丝 螺旋缠绕成直径为30nm的螺旋管， 内径为10nm，螺旋11nm ， 螺旋的每一周由6个核小体组成。 如何进一步压缩30nm的纤丝， Lacmmli等（1977，1979）对细胞中期染色体， 除去组蛋白和大部分非组蛋白， 在电镜下观察到由非组蛋白构成的染色体骨架（scaffold） 和由骨架伸出的30nm纤丝状DNA环状区域（looped domain）， 提出非组蛋白的骨架学说 。 在骨架模型的基础上人们又先后提出了 放射环模型和螺旋环模型（Marsden 和Laemmli, 1979, Paulson, 1982）、 放射环和螺旋环共存模型（Rattner 和 Lin, 1985）、 袢环模型（J. Painta 和 D. Coffey, 1984）、 螺旋折叠 (Boy de Tour, Ey 和 Laemmli U. K. 1988)等模型， 侧环模型 现在一般认为, 30nm的纤丝和非组蛋白骨架结合形成很多侧环， 每个侧环长10-90Kb，约0. 5?m，人类染色体约2