第七章植物基因工程2.pptVIP

第七章 植物基因工程 本章主要内容： 第一节 植物基因工程的发展现状 第二节 植物基因工程方法 第三节 转化子细胞的筛选 第四节 转化体的鉴定与证明 第五节 植物基因工程研究的应用和展望 植物基因工程的概念 植物基因工程是以植物为受体的一种基因操作，即以分子生物学为理论基础，采用基因克隆、遗传转化（根癌农杆菌Ti质粒介导 法、基因枪法、原生质体介导法等），以及细胞、组织培养技术将外源基因转移并整合到受体植物的基因组中，并使其在后代植株中得以正确表达和稳定遗传，从而使受体获得新性状的技术体系。 转基因植物的应用前景和理论意义 通过将目的基因导入农作物或园艺作物中，改变它们的遗传特性，使植物免受病虫的危害、获得抗除草剂的特性、改变种子中淀粉、蛋白质的含量和组成、改变花的形状和颜色、改变植物的育性和不亲合性以及改变植物的抗逆性等。 转基因植物可作为一种生物反应器，生产药用蛋白和植物次生代谢产物或者生产某些有机化合物。 转基因植物为人们研究某一基因功能及其再生长发育中的作用提供了强有力的工具。 国际转基因作物发展现状 从1996年到2004年间，全球转基因植物的生产和利用超出了当初预料，基因作物种植面积增长了近48倍，从1996年的170万公顷增加到2004年的8100万公顷。 国内转基因作物发展现状 在某些领域达到了国际先进水平。2004年全国转基因作物种植面积为370万公顷，成为继美国、阿根廷、加拿大、巴西之后的转基因植物种植第五大国。 第二节 植物基因工程方法 原生质体介导法 基因枪法 根癌农杆菌介导法 一、原生质体介导法 概念：以原生质体为受体，借助于特定的化学或 物理手段将外源ＤＮＡ直接导入植物细胞 的方法。 主要方法: PEG介导的基因转化 原理：利用化学试剂，如聚乙二醇（PEG）聚 烯醇(细胞促融剂)等，诱导原生质体摄取外源DNA分子， 进入原生质体的外源DNA分子就有可能通过某种机制整合到基因组中，完成遗传转化过程。 　如：转基因烟草 脂质体介导基因转化 原理：利用脂类化学物质包裹外源DNA成球体, 通过植物原生质体的吞噬或融合作用把包 含外源DNA的脂质体转入受体细胞。 特点：转化率高; 操作繁琐; 技术性高。 电激法介导基因转化 原理：利用高压电脉冲作用，在原生质体膜上“电激穿孔“，形成可逆的瞬间通道,从而促进外源DNA进入原生质体。 特点： 转化率高； 操作简便 ； 容易造成原生质体损伤。 显微注射介导的基因转化 原理：利用显微注射仪将外源DNA直接注入受体的细胞质或细胞核，从而实现外源基因的转移。 优点： 方法简单、转化率高； 纯物理方法，适用于各种植物和材料，无局限性； 对受体细胞无毒害，有利于转化细胞生长发育； 培养过程无需特殊选择系统。 激光微束介导的基因转化 原理：将激光引入光学显微镜聚焦成微米级的微束 照射培养细胞，在细胞膜上形成能自我愈合的小孔，使加入细胞培养基里的外源DNA流入细胞，实现基因的转移。 优点： 操作简便； 工作效率高； 无宿主限制，适应于各种动植物； 对受体细胞生命活动影响小； 受体的类型广泛； 用于细胞器的基因转化． 二、 基因枪法（微弹轰击法） 工作原理：将外源DNA包被在微小的金粒或钨粒表面，然后在高压的作用下将微粒高速射入受体细胞或组织，微粒上的外源DNA进入细胞后，整合到植物染色体上并得到表达，从而实现外源基因的转化。 动力类型： 火药爆炸力； 高压气体； 高压放电． 操作步骤 （1）制备DNA微弹； （2）准备靶外植体材料； （3） DNA微弹轰击； （4） 培养轰击后的外植体． 转化率影响因素 金属微粒 金粉颗粒较钨粒性质优良,但是价格昂贵. DNA沉淀辅助剂 这些化合物对DNA在微粒上的黏附有重要作用,但对植物受体细胞也产生一定的伤害. DNA纯度及浓度 微弹速度 植物材料内在因素 三、根癌杆菌介导法 根癌农杆菌广泛亲染双子叶植物和裸子植物。根据根癌农杆菌诱导植物形成的根瘤中冠瘿碱