分子生物学-2转录与转录后加工.ppt

transcription and post- transcriptional processing(转录和转录后加工) 主要内容 转录 概述 原核生物RNA聚合酶 原核生物转录过程 真核生物转录特点 真核生物基因的启动子及转录起始复合物的组装 主要内容 转录后加工 rRNA前体的加工 tRNA前体的加工 mRNA前体的加工 RNA的自我剪接 真核mRNA前体的剪接 真核mRNA前体的选择性剪接 RNA的编辑 （一）概述 以DNA为模板合成RNA的过程 。 转录和DNA复制的区别 模板链(template strand)：反义链(anti-sense strand) 非模板链(non- template strand):编码链(coding strand),有意义链(sense strand) different genes may use different strands as template 利用SDS从E.coli RNA聚合酶中分离各个亚基 RNA链的合成方向5′→3′ σ循环:RNA聚合酶与启动子结合,使DNA局部熔解,当转录延伸时, σ因子与核心酶分离,与其它新的核心酶结合,起始新的转录事件. 简单终止子，又称内在终止子（Intrinsic terminator） 转录终止不依赖任何辅助因子。而依靠转录产物形成特殊的茎环二级结构 通读(read-through)：某些因子可使酶越过终止子继续转录。 抗终止因子(anti-termination factor)：引起抗终止作用的蛋白质。 常见于某些噬菌体的时序控制 典型的真核细胞转录产物是单顺反子mRNA 真核细胞转录和翻译在时间上和空间上都是分开的，转录在细胞核，翻译在细胞质。 真核细胞RNApol高度分工 启动子更复杂和更多样性，不同的RNA聚合酶有不同的启动子 真核生物转录需要许多转录因子(transcription factor,TF）的参与。 真核基因DNA的顺式作用元件比原核复杂得多 真核生物的转录调控以正调控为主。 顺式作用元件（Cis-acting elements） 反式作用因子(Trans-acting factors) S1核酸酶图谱技术 引物延伸法 1. 5’端缺失系列分析法: 常用于测定哺乳动物基因调控区的上游边界 5’端缺失系列分析法 2.接头扫描突变法 可以找出存在于基因转录起始位点和5’端边界之间的所有调控元件 方法的基础是构建一系列序列重叠的调控区突变体，每个突变体内各有一个短序列的核苷酸序列被打乱， 然后分别转染培养细胞，或微量注入爪蟾卵母细胞，并分析它们对报告基因的影响 CTD: carboxyl terminal domain（C末端结构域） Amino acid sequence: — Tyr — Ser — Pro — Thr — Ser — Pro — Ser — Target for kinase Function: trigger initiation 序列名称 位置 序列 反式作用因子 TATA-box -25 ~ –30 TATAAAA TBP 序列名称 位置 序列 反式作用因子 CCAAT-box -75 ~ -80 GGCCAATCT CTF、C/EBP GC-box -90 GGGCGG sp1 类型II启动子在转录起始位点周围有保守的序列，是最适表达所需要的。 共同序列为PyPyANT（Py为嘧啶，N为任意碱基） Functions of TFⅡX TBP：特异性地结合TATA box TAF Ⅱ：多亚基，是各种转录因子的靶位点 Functions of TFⅡX TF ⅡA: 激活TBP，促进TF ⅡD结合于TATA box TF ⅡB:结合于TF ⅡD-DNA上，确定转录起始位点，在TF ⅡF协同下募集RNA pol Ⅱ TF ⅡF: 与RNA pol Ⅱ结合，抑制RNA pol Ⅱ与DNA的非特异性结合 TF ⅡH： ATPase, helicase， kinase TF ⅡE ： 促进TF ⅡH的激酶活性 Functions of TAF TFIID 中包括至少8 种TBP偶联因子,分子量为30—250kD,分别命名为TAFⅡ-30～250 TAFⅡ150 识别起始子(1nr)序列 TAF 是基因转录调控的辅助因子，为各种调控因子提供作用的靶位点 它的作用是将上游调控区和远端调控区结合的转录调控因子与PIC联系在一起，而介导各种反式作用因子对基础转录的调控。 缺乏TATA框的启动子含有其他元件包括Inr和下游元件。TAFII250和TAFII1