分子遗传学第6章蛋白质翻译.ppt

6.3.2 tRNA的种类 （1）起始tRNA和延伸tRNA能特异地识别mRNA模板上起始密码子的tRNA叫起始tRNA，其他tRNA统称为延伸tRNA。原核生物起始tRNA携带甲酰甲硫氨酸（fMet），真核生物起始tRNA携带甲硫氨酸（Met）。 （2）同功tRNA同功tRNA既要有不同的反密码子以识别该氨基酸的各种同义密码，又要有某种结构上的共同性，能被AA- tRNA合成酶识别。 （3）校正tRNA??? 校正tRNA分为无义突变及错义突变校正tRNA 。??? 6.3.3 氨酰基tRNA合成酶 aa-tRNAaa synthetase (AARS) 催化氨基酸与tRNA间的反应 生物体有20种氨酰基tRNA合成酶，分子量相差很大 一种合成酶只能识别一种氨基酸和该氨基酸的几种同功tRNA 将tRNA分为20个同功tRNA组 氨酰tRNA合成酶有三个结合位点：氨基酸结合位点、ATP结合位点、tRNA结合位点 催化反应分两步： 第一步：氨基酸和ATP形成相应腺苷酸化氨酰基，释放焦磷酸 第二步：活化型的氨基酸被转移至tRNA，释放AMP 6.3.7 mRNA 所有mRNA都具有两个必须特征： —一段可翻译的密码子序列（开放阅读框，open reading frame，ORF）和一个核糖体结合位点（ribosome binding site, RBS） 在原核生物和真核生物间有重要区别 原核生物mRNA的第一个密码子AUG上游的重要特征是SD序列 真核生物mRNA除第一个密码子AUG的上游是核糖体小亚基扫描AUG的信号序列（CCACC）外，5’端非翻译区上游为帽子结构， 3’端非翻译区内有多聚腺苷化的信号AAUAAA以及其下游的多聚A尾巴 Ribosomes 核糖体有两个结合携带氨基酸的tRNA 的位点 起始密码子为 AUG，细菌中有时也用GUG和UUG。但三种起始密码子的使用效率不同。用GUG代替AUG起始效率下降一半；用 UUG代替GUG起始效率又下降一半 AUG和GUG作为起始密码子代表甲酰化甲硫氨酸；位于内部时AUG代表甲硫氨酸，GUG代表缬氨酸 甲硫氨酸有两种tRNA，一种识别起始AUG，另一种识别延伸过程中的AUG 在细菌和真核生物的细胞器，起始tRNA携带的是甲酰化的甲硫氨酸(fMet-tRNAf)。内部的AUG由Met-tRNA识别 原核生物和真核生物都有三种终止密码子UAG(amber，琥珀密码子)、UAA(ochre，赭石密码子)、UGA(opal，乳石密码子) 在细菌中，UAA使用频率最高，UGA次之，UAG最低 没有一种tRNA能与终止密码子作用，而是由特殊的蛋白质因子促成终止作用，称为释放因子（releasing factor，RF） 原核生物有三种释放因子：RF1（识别UAA和UAG）、RF2（识别UGA和UAA）、RF3（刺激RF1和RF2的活性） 释放因子作用于A位点，并且需要P位被肽基－tRNA占据，此过程需要肽基的转移以及空载tRNA逐出核糖体 tRNA和mRNA在核糖体中的移动 真核生物的起始复合物40S小亚基不是在起始密码子AUG处形成，而是首先在mRNA的5’末端形成，其识别信号是mRNA 5’末端的帽子结构 在帽子处形成的起始复合物沿着mRNA移动，在向下游移动过程中扫描翻译起始密码子前的信号，直到发现起始密码子AUG，60S亚基结合上来形成80S核糖体 起始因子的作用细节大多不太清楚 乙酰化： 主要发生在N末端的?氨基和赖氨酸的?氨基上 甲基化： 发生在?氨基、 ?氨基、精氨酸的胍基和C末端的?羧基和侧链的羧基上 磷酸化： 主要发生在丝氨酸的羟基和苏氨酸及酪氨酸的羟基上 泛酸化：发生在?氨基和?氨基上 转氨基酸作用：主要发生在N末端的?氨基上 多聚ADP核糖基化：主要发生在精氨酸的胍基上 糖基化：可以通过N糖苷键连接于天冬氨酰的酰氨基上，也可以通过O糖苷键连接于丝氨酸和苏氨酸的羟基上以及羟赖氨酸和羟富氨酸的羟基上，也可以通过S糖苷键连接于半胱氨酸的巯基上 真核生物细胞更加复杂，细胞内有各种不同的细胞器，每种细胞器又有不同的膜结构。蛋白质在细胞内的定位更加复杂 蛋白质不但要决定是否越膜，还要决定要越膜的种类。在越膜过程中，有时要在翻译的同时发生一些处理过程（cotranslational processing），而翻译后发生的共价修饰称为翻译后加工（post translational processing） 肽链的折叠在肽链合成没有结束时就已经开始。核糖体可保护30至40个氨基酸残基长的肽链，当肽链从核糖体中露出后，便开始折叠 三级结构的形成几乎和肽链合成的终止同时完成。例如，大肠杆菌β半乳糖苷酶的抗体可识别酶的三