疾病的基因治疗幻灯片.pptVIP

一、基因治疗主要病种： 主要为对人类健康威胁严重的疾病。包括：遗传病（如血友病、囊性纤维病、家庭性高胆固醇血症等）、恶性肿瘤、心血管疾病、感染性疾病（如AIDS、类风湿等）。 　 2、血友病B基因治疗的实践与发展 血友病B（ Hemophilia B）是一种由于凝血因子IX基因（hFIX）发生突变而引起的出血性疾病。其症状表现为自发性出血，严重者可因关节出血导致关节变形和残废甚至死亡。该病为X染色体连锁，在男性中发病率大约为1/100,000。 In vitro Expression of AAV/mFIX Expression of rAAV-hFIXR338A in Mice: Expression of mFIX in Hemophilia B Mouse 宫内胎鼠基因治疗 建立了复制型AAV病毒检测的巢式PCR方法以及HSV病毒检测方法,提高了灵敏度。 研究了肌肉注射重组AAV在体内的分布，分散程度与注射剂量成比例，主要分布在注射肌肉组织,经过半定量PCR发现肌肉中的载体数是其它组织的1,000－10,000倍。 鼠类使用AAV毒性研究,病毒注射后血浆没有发现血清肌氨酸激酶水平的上升，体重没有改变，未见血清的化学参数或血液参数的改变。仅发现少量由淋巴细胞浸润导致的感染,无结构改变。 安全性 以高剂量AAV病毒肌肉注射老鼠试验中，未引起组织毒性,所有动物脾大小正常，未发现囊泡区的增生。在注射区的骨骼肌仅有中等或轻微的慢性感染，感染仅限于肌束膜组织，无肌肉纤维解剖学上的改变。 rAAV注射后,小鼠体内AAV抗体滴度增高. rAAV病毒随机整合问题 3）以其他载体系统进行血友病B基因治疗 微小腺病毒载体介导hFIX小基因离体表达 ELISA方法检测微小腺病毒(miniAd)及第一代腺病毒(firstAd)介导cFIX在血友病B小鼠血浆中的表达 VSVG假型RV介导的hFIX cDNA在血友病B小鼠中的基因治疗 VSVG假型RV滴度高，与传统RV比较抗补体灭活效应高，不同剂量病毒上清液腹腔注射新生血友病B小鼠，小鼠凝血功能改善，凝血活性提高3%以上，表达持续 120d以上。 重组慢病毒载体介导人凝血IX因子的表达及宫内基因治疗 重组慢病毒载体 FUXW FAXW感染离体细胞 293T 、L-02、 BHK 72h后的hFIX蛋白表达 重组FAXW.FUXW病毒在血友病B小鼠体内表达 hFIX的时效曲线 HIV是基因组结构及基因调节机制最为复杂的逆转录病毒之一,基于HIV的重组反转录病毒载体，能广泛感染各种非分裂细胞,也保留了能够整合在宿主染色体上的特点.且免疫反应小,重组HIV是一个很有发展潜力的病毒载体 ABP肝特异性启动子指导人的凝血因子IX的重组HIV载体：重组慢病毒载体质FUXW,FAXWD等 非病毒途径导入基因：尾静脉大容量快速注射法 尾静脉大容量快速注射裸DNA能够介导外源基因在动物肝内高效表达，我们以凝血因子Ⅸ（hFⅨ）为报告基因建立了尾静脉液压法裸质粒转移体系。 人FⅨ在小鼠体内的表达 小鼠尾静脉大容量快速注射10μg CMV-hFIX 质粒 DNA(◆)，注射后不同时间采血，通过ELISA检测血浆中hFⅨ的水平。▲示Ringer’s液注射组。 血友病基因治疗进展与展望 进展 展望 新的AAV 血清型 和慢病毒载体已成功 改进慢病毒,gutless Ad和不同血清 用于FVIII、FIX生产研究 型AAV正在开展 除了肝脏外，其他器官也可以用于产生 基因修复、RNA修复（Trans- FVIII、FIX slicing）提供新的方案设计思路 内源性因子合成和病毒载体引起的免疫 以外周内皮源细胞实施基因修饰的反应是血友病基因转移的潜在威胁 可能具有发展前景 血友病临床试验正在开展 以干细胞治疗实施的基因修饰将成 （RV，AAV，或ex vivo皮肤成纤维 为可能 细胞 ） 4）总结 血友病基因治疗需要安全、有效、无免疫原性的转移系统，并要求持续表达，且必须优于蛋白替代法。 血友病具有很好的