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血红蛋白电泳报告单.doc

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血红蛋白电泳报告单

血红蛋白电泳报告单 血红蛋白电泳 血红蛋白电泳检查(电泳法) 1. 原理 血红蛋白是由两对多肽链组成的复杂分子。每一条链含有血红素和络合铁原子的卜啉。所有血红蛋白的血红素部分都是相同的。所测定的血红蛋白的蛋白部分称之为珠蛋白。正常人血红蛋白多肽链包括α、β、δ和γ。血红蛋白的结构、分子特性取决于形成其肽链的氨基酸顺序和性状。氨基酸不同可形成不同的血红蛋白,其表面电荷不同,在电场中的泳动率不同。本实验在碱性(PH=8.60)条件下,以琼脂糖凝胶电泳的方法进行,对红细胞洗涤后造成溶血,电泳分离血红蛋白后以氨基黑染色。多余的染色液用酸性液体洗去。待琼脂糖凝胶板干燥后,肉眼可直接判别有无电泳条带异常。运用光密度扫描仪检测准确定量分析电泳条带异常情况。血红蛋白异常有二种类型:血红蛋白性质或结构的异常称之为血红蛋白病。血红蛋白中的一条链合成减少引起血红蛋白性质异常,称之为地中海贫血。 2. 标本采集 2.1 标本采集前病人准备:受检者应空腹。 2.2 标本种类:抗凝血 2.3 标本要求:抗凝剂选用EDTA,柠檬酸或肝素均可,避免碘乙酸。常规静脉采血1.8ml,加入含有109mmol/L枸橼酸钠溶液0.2ml的干燥。清洁试管中,充分混匀。 4. 标本储存:储存于2-8℃冰箱中,5天。 5. 标本运输:储存于2-8℃状态下的冰壶或泡沫箱密封运输。 6. 标本拒收标准:细菌污染、溶血或脂血标本不能作测定。 7. 试剂 7.1 试剂名称:血红蛋白电泳检查试剂 7.2 试剂生产厂家:法国Sebia公司 7.3 包装规格:150tests 7.4 试剂盒组成 琼脂糖凝胶 10块 溶血素 1瓶 缓冲液条带 10包×2条 薄滤纸 1×10张 氨基黑(浓缩液)1瓶×100ml点样模具滤纸 10条×1盒 7.5 试剂储存条件及有效期:贮存于室温(15~30℃)或冰箱(2~8℃),不能冷冻。有效期两年。 8. 仪器设备 8.1 仪器名称:SEBIA电泳仪 8.2 仪器厂家:法国Sebia公司 8.3 仪器型号:HYDRASYS 9. 操作步骤 9.1 血红蛋白液制作:抗凝血离心,5000rpm,5分钟,去掉血浆,用10倍体积的生理盐水洗涤红细胞3次,若红细胞体积小于10ul,需特别小心。取10ul红细胞加入130ul溶血液造成溶血。震荡混匀10秒钟,室温下培育5分钟待测。 9.2 启动电泳仪 9.3 将加样器放在一平板上,有数字的一端向上。各加样孔加入10ul溶血的样品,2分钟内加样完毕。将加样器放入保湿盒内,齿端向上(转运时用塑料齿保护架)。等待5分钟,使样品扩散至齿端。打开电泳仪盖,抬起电极和加样器支架。 9.4 使用HYDRAGEL 15 HEMOGLOBINCE时选择仪器的“HBTOTAL”程序(位于链盘左侧)。 9.5 从包装袋内取出缓冲条,拿出末端的塑料片,将缓冲条两端塑料片固定在电极支架背侧的钉上,塑料片应紧贴支架。 9.6 取出凝胶板。将薄的滤纸轻轻吸去凝胶板表面的多余液体,然后立即丢弃滤纸。在电泳仪温度控制板表面的边线内加200ul蒸馏水或去离子水。凝胶面朝上,放置凝胶板,边缘对齐边线。略略将凝胶弯曲,然后放平,使水均匀分布在凝胶板下面而不含气泡。 9.7 降低支架,使缓冲条不接触到凝胶板。 9.8 从保温盒里取出加样器。取时拿保护框。折断加样器齿端保护框。将加样器放在4号位置。 9.9 关上电泳仪盖子,按下键盘左侧的绿色箭头“START”键,电泳开始。 9.10 凝胶染色扫描 9.10.1打开盖子 9.10.2取出并丢弃加样器 9.10.3升高两个支架,握住塑料端取出并丢弃缓冲条。 9.10.4打开凝胶托架,平放,将干燥的凝胶片放入两层间,然后关上托架。 9.10.5将凝胶支架放入染色池 9.10.6取出凝胶支架,打开盖子,取出干燥的凝胶片。 9.10.7在光密度仪的570nm处或以黄色滤光片扫描测定。使用HYDRYS,DVSE或PREFERENCE光密度仪时,使A2片段的标记置于扫描板5mm的标志处。 10. 结果判断与参考范围 扫描得到的只是每种血红蛋白条带的相对浓度值。取出胶片后,首先清洁胶片的背面。判断溶血液的浓度是否合适,主要看基质带的浓度,如基质带浓度过淡,说明溶血液的浓度太淡。正常时A2浓度大约为基质带浓度的1-2倍。 半岁-成人:HbA≧94.5﹪,HbF﹤2.0%,HbA2﹤3.5% 1个月:HbA 12-40﹪,HbF 60-93%,HbA2 0.1-1.0% 6个月:HbA 86-98﹪,HbF 0.84-10.7%,HbA2 0.87-2.9% 脐带血:HbA 4-40﹪,HbF 30-96%,HbA2﹤1.0% 11. 质量控制 建议测定每一批样本时都附有一控制品或含有血红蛋白A,F,C和S的血样本。 12. 临

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