第五章目的基因的获取、扩增与检测及相关技术-简综合-待修.ppt

第五章 目的基因的获取、扩增 与检测及相关技术 1、物理化学方法 2、鸟枪法 3、化学合成法 4、基因文库 5、逆转录合成 6、 PCR技术 7、凝胶电泳 8、酵母双杂交系统9、杂交技术 10、生物芯片 11、 DNA测序 第一节 目的基因的获取及相关技术 一、物理化学方法 二、鸟枪法 三、化学合成法 四、凝胶电泳 五、PCR技术 六、基因文库（基因组文库、cDNA文库） 七、逆转录合成 八、酵母双杂交系统 四、凝胶电泳 五、PCR技术 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）： 20世纪70年代，Khorana首先提出设想， 1983年，美国Cetus公司的Mullis等人创立该技术，并在8年后因此技术获得了诺贝尔奖。 PCR为分子生物学领域带来了一场重大变革。 1、PCR反应体系组成 2、PCR反应过程 3、应用 1、PCR反应体系组成 （1）作为模板的DNA，即DNA模板； （2）寡聚核苷酸引物，要求与被分离（扩增）的目的基因两条链各一端序列互补配对； （3）有热稳定性的DNA聚合酶，如TaqDNA聚合酶； （4）4种dNTP，N=A、G、C、T； （5）反应缓冲液，Tris.HCl（pH8.3），含Mg2+。 寡聚核苷酸引物核苷酸长度：15-30个核苷酸，G+C 45%