第五章分子生物学研究方法上-1.ppt

* * 一、DNA甲基化 * * 5’ 3’ CpG岛主要处于基因5’端调控区域。 启动子区域的CpG岛一般是非甲基化状态的，其非甲基化状态对相关基因的转录是必须的。 目前认为基因调控元件（如启动子）的CpG岛中发生5mC修饰会在空间上阻碍转录因子复合物与DNA的结合。因而DNA甲基化一般与基因沉默相关联。 Rb基因 CpG 频率 * * 一、DNA甲基化 * DNA甲基化(DNA methylation)是研究得最清楚、 也是最重要的表观遗传修饰形式，主要是基因组 DNA上的胞嘧啶第5位碳原子和甲基间的共价结合，胞嘧啶由此被修饰为5甲基胞嘧啶(5-methylcytosine，5mC)。 DNMT1 SAM 胞嘧啶 5-甲基胞嘧啶 胞嘧啶甲基化反应 * S-腺苷甲硫氨酸 DNA的甲基化修饰，指CpG二核昔酸中胞嘧啶的5 位碳原子加上一个甲基基团，形成5 甲基胞嘧啶。由于甲基基团很小，对其研究具有一定的难度。一般而言，可以分辨出甲基化修饰的方法有以下几种： a、甲基化敏感性内切酶； b、亚硫酸氢盐的修饰； c、特异性识别甲基化修饰DNA的抗体或蛋白； d、质谱或色谱等精密检测手段。 由于受到仪器等条件的制约，应用比较广泛的是前三种方法。 DNA nucleotides, the building blocks for the new DNA Temp