第五章原核生物的基因工程.pptVIP

3.包涵体的分离检测 菌体破碎 离心收集 清洗 高速研磨 高压匀浆 差速离心 去污剂处理。如TritonX-100,SDS,脱氧胆盐 4.包涵体表达系统的构建 将启动子和SD 序列安装在外源基因的5‘端即可。一般现在都有商业的表达载体卖，只要获得相应的载体，将外源基因正确的连接上去即可。 （二）分泌性表达 大肠杆菌中的表达蛋白或是留在细胞质中，或是分泌在细胞周质（细胞质与外膜之间）中，或是细胞外膜进入培养基中。作为基因工程产物，要使之分泌到培养基中，需要通过特殊的技术处理。 1.分泌型蛋白表达方式有以下优点： （1）.蛋白分泌到细胞外，使之稳定性提高，主要是避免了蛋白酶的降解作用； （2）.简化了后续的纯化过程，因为培养基中的成分都是蛋白分解物，在培养基中基本只有表达产物，其他成分是小分子，通过简单的分离纯化即可； （3）.分泌蛋白的信号肽将被切除，外源蛋白与信号肽相连，在信号肽被切除时，N-端甲硫氨酸残疾可以被切除。 2.蛋白质分泌的机制 表达蛋白的分泌分2类： （1）共翻译传递：原核细菌的分泌型蛋白的N-端有15—30个氨基酸残疾组成的信号肽（signal peptide),N-端前面几个残基为极性氨基酸，中部及后部为连续排列的疏水残基，它对蛋白质穿过疏水性的细胞膜是极为重要的。 （2）翻译后运输：分子伴娘(chaperone)SecB与新合成