第五章目的基因导入受体细胞2.pptVIP

第五章目的基因导入受体细胞;第三节 重组子的筛选;将摄取外源DNA分子并能使该分子在其中稳定维持的受体细胞统称为克隆子。 把采用各种转化方法或转导方法获得的克隆子叫做转化子（导入外源DNA分子后能稳定存在的受体细胞称为转化子 ），现在这两者有通用的趋向。 含有重组DNA分子的克隆子被称为重组子，如果重组子中含有外源目的基因则又称为阳性克隆子或期望重组子 。 经过各种方法将外源DNA分子导入受体细胞后，获得所需阳性克隆子的过程称为克隆子的筛选。 ;一、遗传表型直接筛选法;;常用的选择标记基因主要是： 抗性基因； 表达产物可以发光或使反应底物显色的基因;选择培养基是： 根据宿主细胞类型配置的培养基，对于细菌受体细胞而言，通常用LB培养基，在LB培养基中加入适量的某种选择物，即为选择培养基。 选择物： 是由载体DNA分子上携带的选择标记基因所决定。;（一）根据载体选择标记初步筛选转化子;（1）抗药性筛选;;正向选择方式;（2）插入失活筛选法;双;双抗药性筛选;;（3）插入表达筛选法;例如pTR262质粒载体，它由pBR322衍生而来，其Tcr基因的上游含有一段λ噬菌体DNA的CI阻遏蛋白编码基因及其调控序列，CI基因表达的阻遏蛋白可以抑制Tcr基因的表达。当外源DNA片段插入CI基因的Hin dⅢ或BglⅠ位点上时，CI基因失活。Tcr基因因阻碍解除而得