木聚糖酶的酶学性质研究-四川农业大学721实验室.PDF

维普资讯 2007年 第43卷 第21濑 AnimalProduction ·鞠籀 产 木聚糖酶的酶学性质研究 杨会涛，陈代文 ，田 刚，余 冰 (四川农业大学动物营养研究所，四川省动物营养与饲料工程重点实验室，四川雅安 625014) 摘 要：采用DNS法对木聚糖酶的一些性质进行了研究。结果表明：该酶的最适反应pH为6．0，在pH5～10之间保 温不同时间后可保持较高的活性；最适反应温度 50℃，液态下低于 60℃热稳定性较好。在 50℃、pH6．0下，以燕麦 木聚糖为底物时，该木聚糖酶的米氏常数K一6．49mg／mL，最大反应速度V～一21．05~tg／(mL。rain)。用不同底物测定 酶活，以燕麦木聚糖为底物的酶活最高。酶在动物 胃中活性较低，而在肠道中活性较高。 关键词：DNS；酶学性质 ；稳定性；食糜；木聚糖酶 中图分类号：Q814、9 文献标识码：A 文章编号：0258—7033(2007)21—0057—04 木聚糖是植物细胞壁的主要组成成分，自身难以 1．2-3 DNS试剂 取酒石酸钾钠 182g，溶于500mL 被单 胃动物消化利用，而且对饲料中其他养分的消化 蒸馏水中，微热(不超过50℃)使之溶解，然后依次加 利用具有明显的干扰和抑制作用。研究表明，添加木聚 入6-3g3，5一二硝基水杨酸 、21．0gNaOH、5．0g苯酚、 糖酶不仅能有效地消除小麦、黑麦、燕麦等谷物饲料中 5．0g无水亚硫酸钠，边加边搅拌，直至溶解，冷却至室 木聚糖的抗营养作用，而且能全面促进饲料养分的消 温，用蒸馏水定容至 1000mL，过滤除去杂质，贮于棕 化和吸收利用，提高饲料代谢能值和动物的生产l生能， 色瓶中，室温保存，至少 1周后使用。 增进畜禽健康，减少畜禽排泄物对环境的污染及拓宽 1-3 酶活测定方法 采用还原糖法 (DNS法)测定 ，具 饲料原料的范围¨]。 体方法见文献6[1。酶活力单位定义在所测条件下，每毫 目前国内外关于木聚糖酶的生产条件及其生产菌 升酶液 (或每克酶制剂)每分钟催化底物生成 1p~mol木 株的特性报道较多2[-51。为了掌握常用饲用酶制剂中木 糖的量定义为 1个酶活力单位。 聚糖酶的酶学性质，本试验对某商品木聚糖酶的最适 2 试验设计 反应 pH、pH稳定性、最适反应温度 、温度稳定性 、反应 动力学参数及其底物特异性、不同蛋白酶对其酶活的 2．1 木聚糖酶的最适反应pH 分别用 100mmo1]L的 影响以及酶在动物消化道食糜 中的活性等进行 了测 不 同pH (3,0、4．0、5．0、55、6．0、6．5、7,0、8．0、9．0)的缓 定，以期对常用的木聚糖酶的酶活测定、保存及应用有 冲液(pH≤8．0的用磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液 ，pH80 一 定的指导作用。 的用甘氨酸一氢氧化钠缓冲液)配制 1．0％的木聚糖底 物，按常规方法测定酶活，以酶活最高者为 100％，在其 1 材料与方法 他条件下的酶活占最高酶活的百分数即为该酶在此 1．1 木聚糖酶 由武汉新华扬生物有限公司提供。 pH条件的相对酶活。 12 主要试剂的配制 2,2 木聚糖酶的pH稳定性 用不同pH的上述缓冲 121 木聚糖溶液 准确称取 1．0000 青确至0．0001 液分别在50℃下处理木聚糖酶溶液30、60min，然后 燕麦木聚糖 (X0627，购买 自Si