测定纤维素酶活性的非技术性因素-江苏农业科学.PDF

江苏农业科学　２０１３年第４１卷第１１期 — ３６５— 许继飞，张艳芬，张一帅，等．测定纤维素酶活性的非技术性因素［Ｊ］．江苏农业科学，２０１３，４１（１１）：３６５－３６７． 测定纤维素酶活性的非技术性因素 许继飞，张艳芬，张一帅，赵　吉，关　燕 （内蒙古大学环境与资源学院，内蒙古呼和浩特０１００２１） 　　摘要：纤维素酶活是酶解纤维素能力大小的指标，是纤维素酶的重要特性之一。由于纤维素酶和纤维素都具有极 其复杂的结构体系，因此只有全面掌握纤维素酶活的测定技术，才能准确获得纤维素酶的活力。本文从测定纤维素酶 活的底物、缓冲液、反应装置、反应终止条件、酶解定糖、计算方法等方面进行了总结，分析了影响纤维素酶活测定的非 技术因素，并给出解决措施。 　　关键词：纤维素酶活；非技术性因素；方法；应对措施 　　中图分类号：Ｑ８１４　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１３）１１－０３６５－０３ 　　纤维素酶是一种多组分的复合酶，现已确定纤维素酶含 在测定酶活时要注意选择底物。目前单一酶活力的测定，常 有３种主要组分，即内切型－ －葡聚糖（纤维二糖水解）酶 采用微晶纤维素（ａｖｉｃｅｌ）、羧甲基纤维素（ｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌｃｅｌｌｕ β ［ｅｎｄｏ－ －ｇｌｕｃａｎａｓｅ（ＥＧ）或Ｃ］、外切型－ －葡聚糖（纤维 ｌｏｓｅ，ＣＭＣ）、纤维二糖（ｃｅｌｌｕｂｉｏｓｅ）为底物，通过纤维素酶水解 β ｘ β 二糖水解）酶［ｃｅｌｌｏｂｉｏｈｙｄｒｏｌａｓｅ（ＣＢＨ）或Ｃ］、－葡萄糖苷糖 获得的还原糖量来表示。其中，用 Ａｖｉｃｅｌａｓｅ表示 ＣＢＨ活力， １ β ［１］ ＣＭＣａｓｅ表示ＥＧ活力，Ｃｅｌｌｏｂｉａｓｅ表示 ＣＢ活力。对于纤维素 （纤维二糖）酶［ｃｅｌｌｏｂｉａｓｅ（ＣＢ）或 －ｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ（ＢＧ）］ 。 β 只有在这３种酶的协同作用下才能有效将纤维素水解成葡萄 酶的总活力，则采用滤纸酶活来表示，即用特定滤纸为底物， 糖，每一种酶的活性均影响整个纤维素酶的活性。为便于研 经酶水解后生成还原糖的量来表示纤维素酶的总活力，称为 ［３］ 究纤维素酶的活性，研究者提出了一些可以测定单酶及总酶 滤纸酶活（ｆｉｌｔｅｒｐａｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙ，ＦＰＡ） 。 活性的方法，其中应用最广泛的方法是测定底物酶解后还原 一般来说，在测定 ＦＰＡ时一般选用 ＷｈａｔｍａｎＮｏ．１滤纸 ［２］ 或新华中速定性滤纸，大小均为 １ｃｍ×６ｃｍ。在测定 糖的生成量，间接得出酶的活力 。由于纤维素酶、纤维素 都有极其复杂的结构体系，因此只有全面掌握纤维素酶活力 ＣＭＣａｓｅ和Ａｖｉｃｅｌａｓｅ酶活时，由于微晶纤维素具有不同结晶 测定的技术与方法，才能准确、快速获得纤维素酶的活力。本 度，而羧甲基纤维素具有不同黏度，不同结晶度和黏度表明其 研究分析了影响纤维素酶活测定的非技术因素，同时给出了 具有不同结构，因此一般选用 Ｓｉｇｍａ公司（瑞士）生产的羧甲 一些建议及解决办法，以期为快速准确测定纤维素酶活提供 基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）和 ＡｖｉｃｅｌＰＨ１０１，质量分数均为 指导。 ０５％。对于 Ｃｅｌｌｏｂｉａｓｅ酶活的测定，选用分析纯级的纤维二 糖就可以达到测定要求，质量分数也为０．５％。 １　纤维素酶的选用和处理