茶卷叶蛾寄生真菌球孢白僵菌几丁质酶基因的克隆与序列-中国农业科学.PDF

福建农业学报 （）： ， ２６４ ５０７ ５１２２０１１ ～ 文章编号： （ ） １００８－０３８４ ２０１１ ０４－５０７－０６ ＦｕｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏ Ａ ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ ｊ 　 　ｆ ｇ 　 　 茶卷叶蛾寄生真菌球孢白僵菌几丁质酶基因的克隆与序列分析 ， ， ， ， 王定锋 曾明森 王庆森 刘丰静 吴光远 （ ， ） 福建省农业科学院茶叶研究所 福建 福安 ３５５０１５ 　 　 ： ， 。 摘 要 球孢白僵菌是最重要的虫生真菌之一 在农林害虫生防中发挥着重要的作用 本研究从茶卷叶蛾球孢白 　 僵菌 菌株中克隆了几丁质酶 基因（ 登录号： ）。根据 上昆虫病原 ＪＹＢｂ２０１１１ Ｂｂｃｈｉｔ１ ＧｅｎＢａｎｋ ＨＱ４３５８７１ ＧｅｎＢａｎｋ － ， ， ， 真菌几丁质酶基因序列同源性设计引物 分别进行 ＤＮＡ ＰＣＲ和总 ＲＮＡ ＲＴ ＰＣＲ反应 对得到的目的片段 回收 － － － ， ， 。 纯化后通过 ＰＭＤ１８Ｔ载体转化到大肠杆菌 ＤＨ５ 中 获得几丁质酶基因序列的重组质粒 ＰＭＤ１８ｃｈｉｔ并测序 － α － ， ， ， 结果表明 ＤＮＡ ＰＣＲ和总 ＲＮＡ ＲＴ ＰＣＲ获得的基因序列完全一样 都是一个完整 ＯＲＦ序列 含 １０４７ｂ 核酸序 － － － 　 ｐ ， ， ， ， 。 列 编码 个氨基酸 信号肽长度为 个氨基酸 成熟蛋白理论分子量约为 理论等电点为 该蛋 ３４８ ２２ ３６．７８ｋＤ ５．９５ ， （ ） （ ）， 白序列中包含 个保守区域 即底物结合区域 和几丁质的活性位点 该蛋白可归为几丁质酶 ２ ＳＩＧＧ