Biozo与l与-RNA.ppt

用BIOZOL试剂小量提取植物总RNA Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 实 验 目 的 学习用试剂盒从植物中提取总RNA的方法。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 实 验 原 理 RNA是一类极易降解的分子，要获得完整的RNA必须在提取过程中最大限度地抑制内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解作用。高强度变性剂异硫氰酸胍，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，所以RNA从细胞中释放出来时不被降解。细胞裂解后，除了RNA，还有DNA，蛋白质和细胞碎片，通过酚、氯仿等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA，LiCl可以选择性的沉淀RNA，使RNA进一步得到纯化。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. BIOZOL 试剂是总 RNA 提取试剂 , 可直接用于人类、动物、植物、细菌等细胞或组织中的总 RNA 提取。样本在 BIOZOL 中充分裂解后加入氯仿离心 , 形成上清层、中间层和有机层 , 然后通过收集水样层 , 用异丙醇沉淀来得到 RNA 。????BIOZOL 试剂操作简便易行 , 可以同时处理多个样品 , 得到高质量的 RNA 。纯化的 RNA 可以直接用于 RNA 印迹分析、斑点杂交、 poly(A)+ 选择、体外翻译、 RNA 酶保护分析 RT-PCR 分析、构建 cDNA 文库等 RNA 研究。 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 实 验 步 骤 ? 注意事项：RNA酶是导致RNA降解最主要的物质,其活性很难被完全抑制,并广泛存在于人体皮肤、吐沫和各种物体的表面等,所以,预防其污染,在RNA提取过程中是十分必要的,抽提RNA过程中任一环节的不正确操作都可能导致RNA酶的污染。实验前请详细阅读使用手册,已达到最好的提取效果： ?? 全程佩戴手套、口罩,以防RNA降解; ?? 使用无RNA酶的器皿和吸头抽提RNA; ?? 器皿和吸头的无RNA酶处理,可使用如下方法：金属制品洗净,在150℃烤箱中烘烤6～8小时。玻璃制品和塑料器皿及吸头可以用0.1%(v/v)的焦碳酸二乙酯（DEPC）的水溶液于37℃浸泡2小时或常温浸泡过夜(12小时),甩干后,然后在151bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分钟,最后于60℃烘干备用; ?? 有条件的实验室可为RNA实验准备单独的房间和单独的仪器; Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. 裂解???样品在这一步骤充分裂解，释放出RNA,DNA, 蛋白 分离???根据RNA,DNA,蛋白的特点，利用试剂将RNA,DNA，蛋白分离开，RNA在上清层 沉淀???利用核酸不溶解于醇类物质，进一步分离出RNA,让 RNA 沉淀出来 洗涤???将沉淀出来的RNA，洗涤，去除盐类杂质 溶解???在阴凉处适度干燥RNA沉淀,溶解，待用 Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd. ⊕裂解 ⑴动/植物组织: 在液氮条件下将样品研磨成粉末，匀浆时组织样品量按照建议用量;每50-100mg 材料加1mlBIOZOL试剂。 ⑵单层贴壁生长的细胞: 吸尽培养液,在直径3.5 cm 的培养板中加入1mlBIOZOL,放置5～10 分钟,在放置过程中,晃动2～3 次,保证细胞裂解完全,将细胞裂解物移至离心管中。一般每20～30 cm2 加1 ml BIOZOL,细胞量