第4次_4章-1幻灯片.pptVIP

根据膜材料和不同进料液的特性，商品应用的膜产品通常采取如下几种结构形式：管式；中空纤维；卷式；平板式。 四、层析分离（ Chromatography） 层析方法 分离依据 吸附层析 利用吸附剂对不同物质的吸附力不同而使混合物中各组分分离 分配层析 利用各组分在两相中的分配系数不同，而使各组分分离 离子交换层析 利用离子交换剂上的可解离基团（活性基团）对各种离子的亲和力不同而达到分离目的 凝胶层析 以各种多孔凝胶为固定相，利用流动相中所含各种组分的相对分子质量不同而达到物质分离 亲和层析 利用生物分子与配基之间所具有的专一而又可逆的亲和力，使生物分子分离纯化 层析聚焦 将酶等两性物质的等电点特性与离子交换层析的特性结合在一起，实现组分分离 （一） 吸附层析 1. 概况 层析技术，亦称色谱技术，是一种物理的分离方法。它是利用混合物中各组分的物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中，其中一个相为固定的(称为固定相)，另一个相则流过此固定相(称为流动相)并使各组分以不同速度移动，从而达到分离。吸附层析是各种层析技术中应用最早的技术。吸附剂来源丰富、价格低廉、可再生，吸附设备简单。 2.原理 吸附作用是物体表面的一个重要性质，理论上任何两相都可以形成界面，其中一相的物质或溶解在其中的溶质在另一相表面上发生密集行为，称之为吸附。溶质从溶液中到停留在固体表面上的过程，称为吸附现象。 在吸附柱层析中，使用的固定相基质是颗粒状的吸附剂。在吸附剂表面存在许多吸附位点，这些位点通过物理的、化学的等各种作用力与蛋白质和核酸等生物大分子结合，其结合力的大小与各种生物分子的结构和吸附剂的性质有密切关系。在洗脱时，层析柱内不断发生解吸、吸附、再解吸、再吸附的过程。即被吸附在吸附剂上的物质在洗脱剂的作用下解吸而随溶液向下移动，又遇到新的吸附剂，被重新吸附，后面流下的洗脱液再把它解吸而向下流动，然后再被下层的吸附剂吸附。如此反复进行，经过一段时间以后，该物质向下移动—段距离。 3．常用吸附介质及其性质 (1)活性炭： 活性炭的吸附原理：活性炭对化合物的吸附机制主要是活性炭分子中的活性基团(如羟基等)与被分离物质分子中的某些基团产生范德华力形成的吸附作用。 (2) 硅胶：硅胶是以硅酸盐为原料制成的。硅胶的吸附活性决定于其含水量，不同类型的吸附层析所需硅胶的含水量不同。 (3) 羟基磷灰石（结晶磷酸钙）： 磷酸钙是一种极性吸附介质，适于分离生物大分子(如蛋白质、核酸等)。 除了以上几种外，常见的还有氧化铝、聚丙烯酰胶、聚苯乙烯等。 4. 吸附层析技术 (1) 吸附剂的选择 (2) 溶剂和洗脱剂的选择 吸附层析是各种层析技术中应用最早的技术。吸附剂来源丰富、价格低廉、可再生，吸附设备简单。 * 第四章 酶的提取与分离纯化(1) 酶的提取(extraction)与分离(separation, isolation)纯化(purification): 在适当的条件下将酶从细胞或其它含酶原料溶解到溶剂（液）中，再与杂质分开，而获得所需酶制品的技术过程。 酶的提取、分离纯化技术路线 离心分离，过滤分离，沉淀分离，层析分离，电泳分离，萃取分离，结晶分离等。 细胞破碎 酶提取 酶分离纯化 酶浓缩 酶贮存 动物、植物或微生物细胞 发酵液 酶的纯化过程，约可分为三个阶段： (1) 粗蛋白质 (crude protein): 采样 → 均质打破细胞 → 抽出全蛋白，多使用 盐析沉淀法；可以粗略去除蛋白质以外的物质。 (2) 部分纯化 (partially purified): 初步的纯化，使用各钟 柱层析法。 (3) 均质酶 (homogeneous): 目标酶的进一步精制纯化，可用制备式电泳 或 HPLC。 酶分离纯化不同阶段 Section 1 酶的提取 细胞发酵产生的酶有两种，一种是胞内酶，必须对菌体进行破碎，将酶抽提到液相；另一种是胞外酶，在发酵时酶已经透过细胞壁进入发酵液中。 一、生物组织的破碎 许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。 1）机械破碎 2）物理破碎 3）化学破碎 4）酶促破碎 非机械破碎 DY89-I型 电动玻璃匀浆机 JY92-II D超声波 细胞粉碎机 高压细胞破碎机 细菌破碎的主要阻力来自于肽聚糖的网状结构，网状结构越致密，破碎的难度越大，革兰氏阴性细菌网状结构不及革兰氏阳性细菌的坚固； 酵母细胞壁破碎的阻力也主要决定于壁结构交联的紧密程度和它的厚度； 由于霉菌细胞壁中含有几丁质或纤维素的纤维状结构，其强度比细菌和酵母菌的细胞壁有所提高。 不同种类的细胞结构差别很大，破碎的难易程度也不同，由难到易的大致排列顺序为：植物细胞＞真菌（如酵母菌）＞革兰氏阳性细菌＞革兰氏阴性细菌＞动物细胞。 机械破碎 捣