发酵9与嫌腩目九 透明质酸的生产.pptVIP

项目九 透明质酸的生产;化妆品级透明质酸 透明质酸是高档化妆品不可缺少的天然保湿成分，可以广泛用于保湿、抗衰老、防晒、创伤护理、亮发素、洗发护发香波及浴液等产品中，添加量一般为0.05%～0.5% 食品级透明质酸 目前，透明质酸在美国、日本等发达国家被广泛用于美容保健食品中，深受消费者认可。 20世纪八十年代末，口服透明质酸美容保健食品出现于日本。 ;医药级透明质酸 透明质酸可用作眼科人工晶体植入手术的粘弹剂、骨性关节炎和类风湿性关节炎等关节手术的填充剂，作为媒介在滴眼液中广泛应用，还用于预防术后粘连和促进皮肤伤口的愈合。透明质酸与其它药物反应形成的化合物对药物发挥缓释作用，可达到定向和定时释放的目的。随着医药科技的发展，透明质酸在医药方面的应用将越来越广泛。 透明质酸是减缓关节炎疼痛的良药 ; 透明质酸在体内的生理功能已不局限于网状结构及黏弹性等物理机械功能。透明质酸受体的发现对透明质酸的认识有了质的飞跃，揭示了其通过受体的结合，调节细胞的功能从而在胚胎发育，肿瘤发生，组织愈合等方面扮演了重要角色。透明质酸受体的发现还有助于开发新的给药途径。明确掌握透明质酸代谢机制，通过发现其代谢异常，可对一些疾病的诊断和治疗具有指导意义。;项目;利用天然原料即从动物组织中提取 主要原料是人的脐带、鸡冠和牛眼玻璃体等。用丙酮或乙醇将原料脱脂、脱水、风干后，用蒸馏水浸泡、过滤，然后以氯化钠水溶液和氯仿溶液处理，之后加入胰蛋白酶保温后得到混合液，最后用离子交换剂进行处理、纯化得到精制的透明质酸，该法提取率极低，仅为1％左右 。;生物发酵法 以葡萄糖作为碳源，在培养基中发酵48h，发酵结束后，过滤除去菌体和杂质，然后用醇沉淀法等简单操作即得到高纯度的透明质酸。采用发酵法制得的透明质酸，优点是能按商品设计来设定分子量。发酵法的关键在于菌种的选择，目前多选用链球菌属类菌种等。;兽疫链球菌 镜下观察，圆圆的，常见多个细菌连在一起，成链状，故称链球菌。以透明质酸为主要成分的荚膜围绕在菌体周围，保护细菌免受伤害。 链球菌正常生长是一个产酸过程，通常做法在稳定期提高发酵液的pH值。结果部分链球菌因pH突然变大而停止生长并产生荚膜，那些继续生长的链球菌会不断产酸，使发酵液pH恢复正常。此时再次提高发酵液pH。如此往复菌体不但能正常生长而且能不断的产生我们所需要的荚膜。但是整个过程中pH值不能调的过高，如果过高，菌体因无法承受而被杀死。 ;链球菌属于兼性厌氧菌，在透明质酸的发酵工艺中，大多数采用有氧发酵。 有氧发酵的葡萄糖能量代谢可产生更多的ATP，有利于UTP生成，而UTP是生成透明质酸的两个活化前体物，即UDP-葡糖醛酸和UDP-N-乙酰氨基葡糖所必需的物质。因此从代谢调控的角度来说，有氧发酵有利于透明质酸的合成。 ;培养基 斜面培养基/％：葡萄糖0.2，牛肉膏1.0，蛋白胨2.0，酵母抽提物 0.5，NaCl 0.2，Na2HPO4?12H2O 0.1，KH2PO40.012，琼脂2.0；pH7.0～7.2。 种子培养基/％：同斜面培养基，不加琼脂。 发酵培养基/％：蛋白胨 2 .0，酵母抽提物1.0，MgSO4?7H2O 0.1，K2HPO4 0.25，NaCl 0.2；pH7.0～7.2。葡萄糖配成50％的水溶液，单独灭菌。;生产透明质酸用培养液，氮源为蛋白胨，酪蛋白水解液，酵母膏，牛肉膏，大豆蛋白水解液，尿素，无机铵盐等。其中，酵母膏最为常用，除作为氮源外，还含有多种维生素和生长因子，有些是链球菌生长所必需的。 在发酵液中添加一定量的谷氨酸和精氨酸，可提高透明质酸的产率。 碳源主要是各种单糖，蔗糖和淀粉水解物，最常用的是葡萄糖，要求药品级口服葡萄糖，其他还有磷酸盐，硫酸盐等无机盐。纯化水不含金属离子，溶解物料。氢氧化钠：为中和剂，因为发酵时产酸，导致PH降低，从而减缓反应速率。;斜面种子→摇瓶种子→接种→发酵培养→补料→放罐→发酵液（加乙醇粗提）→粗提液（加助滤剂、活性炭，调pH→过滤（去除杂质）→滤液（乙醇沉淀）→沉淀物（脱水干燥）→成品透明质酸; 三、种子扩大培养;500L种子罐接种操作 1、调种子罐压0.05Mpa；调大接种口排污阀门，调小接种口靠罐阀门，使排气口有气排出即可，关闭接种口排污阀门； 2、点燃火焰圈，放于接种口下方5cm处； 3、在火焰保护下，迅速解开接种口外套，解开软管上包扎用棉绳，迅速将软管套上接种口； 4、移走火焰圈，用卡箍将软管套牢； 5、打开接种口靠罐阀门；;6、逐渐升高罐内压力至0.08Mpa，稳定后缓慢降低罐压（压力不能低于0.03Mpa），将种子液接入罐内； 7、如一次不能接完，可重复⑥中的升压和降压，直至种子液全部接入罐内