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第十二章 DNA序列测定 DNA测序流程 DNA提取 目的片段扩增 电泳分离 胶回收 DNA克隆 测序反应 Sanger双脱氧链终止法 PCR反应 反应组分 模板 引物 聚合酶 原料 dNTP, ddNTP 水 测序反应 ABI BigDye version 3.0 Kit 反应组成 模板 ？ng 引物 3.2 pmol/μl 1 μl Buffer (5×) 2 μl BigDye (2.5×) 4 μl 水 补齐至20 μl 测序反应 平衡1：BigDye vs Buffer 测序反应 测序反应 ABI BigDye version 3.0 Kit 反应组成 模板 ？ng 50ng/μl 1.5 μl 引物 3.2 pmol/μl 1 μl 1 μl Buffer (5×) 2 μl 1.5 μl BigDye (2.5×) 4 μl 1 μl 水 补齐至20 μl 10 μl 实验过程中的几个注意事项 取模板之前，应先充分混匀DNA ∵不是均一的溶液 定量操作 Takara DL2000 Marker, 5 μl电泳，每条带的亮度相当于50 ng DNA。定量时，取1 – 2 μl模板DNA上样电泳，与大小相近的Marker的条带比较亮度确定模板DNA浓度。 实验过程中的几个注意事项 测序反应