第三章灭活剂保护剂与免疫佐剂.pptVIP

第三章 灭活剂、保护剂与免疫佐剂 （inactivation、 protector、 adjuvant） 第一节 灭活 一、灭活 兽医生物制品生产中的灭活，是指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但尽可能不影响其免疫原性，被灭活的微生物主要用于生产灭活疫苗；或指破坏诊断血清或待检血清中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。 微生物的灭活和致弱有本质区别 灭活的主要方法有两类：物理学方法和化学方法 物理学灭活：包括加热和射线照射等方法。前者过去使用较多，容易造成菌体蛋白变性，现基本不用；后者主要通过破坏核酸来达到灭活微生物的目的，而其它有机物一般不受影响（60Co 照射血清，照射剂量以Gy来表示）。 化学灭活：目前采用最多。用于灭活微生物的化学试剂或药物称为灭活剂。 1Gy（戈瑞）就是lkg物质吸收lJ（焦尔）的能量 50～150Gy是抑制发芽的照射剂量； 100～1500Gy是杀死害虫的照射剂量； 1～5kGy是抑制部分微生物的照射剂量； 3～7kGy是脱水蔬菜的照射剂量； 15～60kGy是辐射完全杀菌的照射剂量 二、常用灭活剂的灭活机理与应用 甲醛溶液（formaldehyde）：是最古典的灭活剂，至今仍是生物制品研究和制造中最主要的灭活剂。 灭活机理 ：甲醛的醛基作用于微生物蛋白质的氨基产生羟甲基胺，作用于羧基形成甲基二醇单酯, 作用于羟基生成羟基甲酚，作用于巯基形成亚甲基二醇。上述反应生成的羟甲基等代替敏感的氢原子，破坏生命的基本结构，导致微生物死亡。 灭活浓度：适当浓度的甲醛可使丧失增殖力或毒性， 保持抗原性和免疫原性，一般浓度为： 需氧细菌0.1%~0.2%， 厌氧细菌0.4%~0.5%； 病毒0.05%~0.4%（多数为0.1%~0.3%） 烷化剂 (alkylating agent) ：是含有烷基的分子中去掉一个氢原子基团的化合物，它能与另一种化合物作用，将烷基引入，形成烷基取代物。 灭活机制：烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂或双螺旋联交联，因此改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍RNA合成，从而抑制细胞的有丝分裂，也可干扰核酸的代谢。 常见烷化剂：乙酰基乙烯亚胺（口蹄疫）、二乙烯亚胺（口蹄疫） 、缩水甘油醛（口蹄疫、大肠杆菌、新城疫等）。 苯酚（phenol）：使微生物蛋白质变性、抑制特异酶系统（如脱氢酶和氧化酶等），从而使其失去活性。生物制品的常用量为0.3%-0.5%。 结晶紫(crystal violet)：是一种碱性染料，灭活机制：其阳离子与微生物蛋白带阴性的羟基形成弱电性化合物（如COOH、PO3、H2等），妨碍微生物的正常代谢，也可能扰乱微生物的氧化还原作用，使电势太高不适于微生物的增殖（如猪瘟结晶紫疫苗、鸡白痢染色抗原等）而灭活。 ?-丙酰内酯：是一种良好的病毒灭活剂。对皮肤、粘膜和眼有强烈刺激性，液体对动物有致癌性，病毒灭活后，能保持良好的免疫原性，主要用于狂犬病灭活疫苗的制备。 三、影响灭活作用的因素 灭活剂特异性 微生物种类与特性 灭活剂浓度 灭活温度 灭活时间 酸碱度 有机物的存在 灭活剂特异性 某些灭活剂只对一部分微生物有明显的灭活作用，不同的灭活剂对同一种微生物的灭活效果也不同，如酚类能抑制和杀灭大部分细菌的繁殖体，5%的石炭酸溶液于数小时内能杀死细菌的芽孢。真菌和病毒对酚类不太敏感。 微生物种类与特性 不同种类的微生物如细菌、病毒、真菌以及革兰氏阳性菌与革兰氏阴性菌对各类灭活剂的敏感性并不完全相同；细菌的繁殖体及其芽孢对化学药物的抵抗力不同；生长期和静止期的细菌对灭活剂的敏感程度也有一定差别。此外，细菌的浓度也会影响灭活的效果。 灭活剂浓度：以甲醛为例，甲醛浓度越高，灭活脱毒越快，但抗原损失量亦较大。有时可以将甲醛溶液分数次加入，加量由小至大，PH值由低到高，温度由室温开始，逐步提高到允许的最高温度，这样对于保护抗原的免疫原性有一定好处。 灭活温度：通常情况下，灭活作用随温度上升而加速。但如果温度超过40℃或更高，对微生物的抗原性将有不利影响。 灭活时间：灭活时间与灭活剂浓度和作用温度密切相关。一般随着灭活剂浓度及作用温度升高，灭火时间则缩短。在生物制品生产中，应以保证制品安全和效力，采用低灭活剂剂量、低作用温度和短时间处理为最佳。 酸碱度 在微酸性时灭活速