8叶绿体分离与其蛋白质提取方法研究.pdfVIP

南方农业学报 2011，42(5)：463—467 JournalofSouthernA euhure ·463· 甘蔗叶绿体分离及其蛋白质提取方法研究 孙 富l’，黄巧玲l，，黄 杏l，，张保青l1，陈明辉l，杨丽涛1，，李杨瑞 ’3’4．5 (广西大学农学院，南宁 530005； 亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室，南宁 530005；。广西农业科学院， 南宁 530007； 广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室，南宁 530007； 广西甘蔗遗传改良重点实验室／中国农业科学院 甘蔗研究中心，南宁 530007) 摘要：【目的】探索甘蔗幼苗叶片完整叶绿体的分离纯化及其叶绿体蛋白质提取方法 ，为深入研究甘蔗叶绿体蛋 白质组学奠定基础。方【法】以甘蔗品种ROC22幼苗叶片为材料，通过差速离心法制备粗叶绿体制品，分别利用蔗糖密 度梯度离心和Percoll梯度离心进一步分离纯化完整叶绿体；提取叶绿体蛋白质，并进行电泳分析。【结果】两种密度梯 度离心法均可获得纯度和完整率较高的叶绿体 ，但蔗糖密度梯度离心法具有分离时间较短、成本较低 ，分离的叶绿体 完整率、纯度和含量高等特点，并且提取的叶绿体蛋白质电泳条带清晰，蛋白质数量多且较全。【结论】与Peeoll梯度离 心法相比，蔗糖密度梯度离心法更适宜于在亚细胞水平上进行甘蔗蛋白质组学研究。 关键词：甘蔗；叶绿体；蛋白质；密度梯度离心 中图分类号：566．101 文献标识码 ：A 文章编号：2095—1191(2011)05—0463—05 Isolationofchloroplastsfrom leaftissueofsugarcaneand extractionoftheirprotein SUNFu ，HUANGQiao—ling ，HUANGXing ，ZHANGBao—qing一，CHENMing—hui， YANGLi—tao ．LIYang—rui，， (AgriculturalCollege，GuangxiUniversity，Nanning530005，China；StateKeyLaboratoryofSubtropicalAgriculture BioresourcesConservationandUtilization，Nanning 530005，China； GuangxiAcademyofAgriculturalSciences，Nanning 530007，China； GuangxiCropGeneticImprovementandBiotechnologyLab，Nanning 530007，China； GuangxiKey La boratory ofSugarcaneGeneticImprovement／SugarcaneResearchCenterofChineseAcademyofAgriculturalSciences， Nanning530007，China) Abstract：【Objective]Inordertostudysugarcanechloroplastsproteomics，themethodsforisolationandpurification ofintactchloroplastanditsproteinextractionfromleavesofsugarcaneseedlingwerecompared．M【ethod】Theleavesof youngseedlingofsugarcanevarietyROC22weresampledtoisolatethechloroplastsbydifferentialcentrifugation．Theob— rainedintac