生物制药工艺学 第二十章.pptVIP

此外，直接从动物的肿瘤组织中建立的细胞系也是转化的细胞。由于转化的细胞具有无限生命力，而且常常倍增时间较短，对培养条件和生长因子等要求较低，故更适于大规模工业化生产的需要。 为了获取上述所需细胞，除原代细胞需靠自己临时用动物组织制备外，一般都可从各国的细胞库，如美国细胞保存中心和欧洲动物细胞保存中心等，或有关研究机构索取。而各单位自己建立的细胞系除保存在各自单位外，多数同时也送交细胞保存中心保存。我国目前还未成立中心，细胞分散保存在各研究所。 4、基因工程细胞的构建和筛选 尽管上述的原代细胞、二倍体细胞系和转化细胞系三者都已被用于生产中，但在生产中采用更多的、更有前景的是融合细胞及采用基因工程手段构建的各种工程细胞。 （1）、真核细胞基因表达载体的构建 为了要将外源基因在动物细胞中高效表达，首先要将其构建在一个高效表达载体内。目前一般使用的载体有两类： 一类是病毒载体，如牛痘病毒、腺病毒、逆转录病毒和杆状病毒等。 另一类是质粒载体，而且常常是穿梭质粒载体，即在细菌和哺乳动物细胞两者体内都能扩增。 （2）、基因载体的导人和高效表达工程细胞株的筛选 载体构建后，如何导人动物细胞呢？目前的方法大致可分为4类 ： 融合法 化学法 物理法 病毒法 细胞融合法 DNA-磷酸钙沉淀法 电穿孔法 重组逆转录病毒介导法 脂质体介导法 DEAE一葡聚糖法 显微注射法 重组洲A病毒介导法 原生质融合法 染色体介导法 基因枪法 多瘤病毒样颗粒介导法 微细胞介导法 鬼影红细胞介导法 外源基因导入动物细胞的效率是很低的，依靠构建载体内的选择标记采用相应的筛选系统 ，从上百万个细胞中筛选出已整合并表达外源基因的工程细胞 。 FDA的规定，用于生产的工程细胞必须建立两个细胞库：原始细胞库和生产用细胞库。 5、动物细胞的培养条件 （1）所有的与细胞接触的设备、器材和溶液，都必须保持绝对无菌，避免细胞外微生物的污染。 （2）必须有足够的营养供应，绝对不可有有害的物质，避免即使是极微量的有害离子的掺入。 （3）保证有适量的氧气供应。 （4）需随时清除细胞代谢中产生的有害产物。 （5）有良好的适于生存的外界环境，包括pH、渗透压和离子浓度等。 （6）及时分种，保持合适的细胞密度。 6、动物细胞大规模培养的方法 动物细胞培养的方法，一般可根据培养细胞的种类分为原代细胞培养和传代细胞培养。 又可根据培养基的不同分为液体培养和固体培养。 还可根据培养容器和方式的不同分为静止培养、旋转培养、搅拌培养、微载体培养、中空纤维培养、固定床或流化床培养等。 但从生产实际看，动物细胞的大规模培养主要可分为悬浮培养、贴壁培养和贴壁-悬浮培养。 1、悬浮培养 所谓悬浮培养即让细胞自由地悬浮于培养基内生长增殖。 2、贴壁培养是必须让细胞贴附在某种基质上生长繁殖的培养方法。它适用于一切贴附依赖性细胞（贝占壁细胞），也适用于兼性贴壁细胞。该方法的优缺点与悬浮培养正好相反，优点是适用的细胞种类广（因为生产中所使用的细胞绝大多数是贴壁细胞），较容易采用灌流培养的方式使细胞达到高密度 。 3、贴壁一悬浮培养，或称假悬浮培养 （1）微载体培养 （2）包埋和微囊培养 动物细胞生物反应器 1、搅拌罐式生物反应器 2、气升式生物反应器 3、中空纤维式生物反应器 4、透析袋或膜式生物反应器 5、固定床或流化床生物反应器 植物组织和细胞培养是指在无菌和人工控制的营养（培养基）及环境条件（光照、温度等）下，研究植物的细胞、组织和器官以及控制其生长发育的技术。 植 物 细 胞 培 养 一、基本概念 1、植物组织和细胞培养 ①幼苗及较大植株的培养，即为“植物培养” ； ②从植物体各种器官的外植体增殖而形成的愈伤组织的培养叫做“愈伤组织培养” ； 植物无菌培养技术分如下几类： ③能够保持较好分散性的离体细胞或较小细胞团的液体培养，称为“悬浮培养” ； ④离体器官的培养，如茎尖、根尖、叶片、花器官各部分原基或未成熟的花器官各部分以及未成熟果实的培养，称为“器官培养” ⑤未成熟或成熟的胚胎的离体培养，则为“胚胎培养” 。 悬浮培养是指在液体培养基中，能够保持良好分散性的细胞和小的细胞聚集体的培养。在此培养条件下组织化水平较低。 2、悬浮培养 3、细胞培养 分生组织培养又称生长锥培养，是指在人工培养基上培养茎端分生组织细胞。分生组织，如茎尖分生组织的部位仅限于顶端圆锥区，