普通遗传学第五章遗传的分子基础.pptVIP

第五章 遗传的分子基础 第一节 DNA作为主要遗传物质的证据 遗传物质必须具备的条件 对遗传物质的早期推测 肺炎双球菌转化试验 肺炎双球菌体内转化实验 1928年，英国格里菲思（Griffith）的肺炎双球菌感染小鼠实验 噬菌体侵染与繁殖实验 1952年，赫尔希 （ Hershey ） 和蔡斯 （ Chase ）的噬菌体侵染与繁殖试验 实验过程及结果总结 烟草花叶病毒拆分感染实验 1956年 格勒（Girer）和施拉姆（Schramm） 烟草花叶病毒（TMV）是由RNA与蛋白质组成的管状微粒，它的中心是单螺旋的RNA，外部是蛋白质的外壳。感染烟草后，叶片出现花叶症状，生长处于不良状态，叶常呈畸形。 PCR (Polymerase Chain Reaction) 聚合酶链式反应 复制起点：AT富集区 1. DNA复制的原点、方向与方式 方向： 双向（真核生物，多数细菌、病毒） 单向（噬菌体P2） 原核生物：一个复制原点 真核生物：多个复制原点 DNA复制方式 从头起始 即复制叉式复制 在复制原点解开成两条单链，分别作为模板，合成互补链，出现复制叉。 共价延伸 先导链共价结合在一条亲本链上 滚环式复制 切断其中一条单链，5’端与蛋白质结合，3’端 DNA聚合酶催化加核苷酸。3’端不断延长，5’端不断甩出。甩出单链到一定长度后，开始复制其互补链。 DNA聚合酶 共同点： 原料：脱氧核苷酸三磷酸（dNTP） 模板：DNA 需要RNA引物：含3’-OH 合成方向：5’-3’ 2. 与DNA复制相关的酶和蛋白质 真核细胞：5种DNA聚合酶 α（定位于胞核，参与复制引发，不具5’－3’外切酶活性） β（定位于核内，参与修复，不具5’－3’外切酶活性） γ（定位于线粒体，参与线粒体复制，不具5’－3’，有3’－5’ 外切活性） δ（定位核，参与复制，具有3’－5’，不具5’－3’外切活性） ε（定位于核，参与损伤修复，具有3’－5’，不具5’－3’外切活性） 原核细胞：(大肠杆菌为例) 5种DNA聚合酶 DNA聚合酶Ⅰ（1956年 Kornberg）、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ（1999年），都与DNA链的延长有关。 大肠杆菌的3种DNA聚合酶 DNA链的延长 修复紫外线引起的DNA损伤 修复DNA损伤/复制时RNA引物切除及其缺口填补 主要功能 多亚基酶 多亚基酶 单体酶 亚基 有（单链有效） 无 有（双链有效） 5’-3’外切酶活性 有 有 有 3’ - 5’外切酶活性 强 弱 弱 5’-3’聚合酶活性 DNA聚合酶Ⅲ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶催化反应 其他酶和蛋白 连接DNA双链中的单链切口 DNA连接酶 合成RNA引物 引物合成酶 稳定单链区 单链结合蛋白 使双链DNA解链 DNA解旋酶 引入或松开超螺旋 拓扑异构酶 功能 3. DNA的复制过程 （大肠杆菌为例） ⑴ DNA复制的起始 ①拓扑异构酶解开DNA超螺旋。 ②DnaA蛋白识别复制的起始位点（复制原点）。 ③DNA解旋酶在ATP供能下，每分钟旋转3000次解开双螺旋。 ④单链结合蛋白结合在分开的单链上，避免产生单链内配对。 ⑤DNA拓扑异构酶解决由于复制叉推进产生的超螺旋问题。 ⑥引物合成酶合成RNA引物。 ⑵DNA链的延长在DNA聚合酶Ⅲ作用下，以四种脱氧核苷三磷酸(dATP,dGTP,dCTP,dTTP)为底物，在RNA引物的3’端以磷酸二酯键连接上脱氧核糖核苷酸并释放出焦磷酸。 DNA聚合酶Ⅲ 5’-3’聚合酶活性前导链: 连续合成滞后链: 分段合成冈崎片段:在3 ′?5′方向链上，仍按从5′? 3′的方向一段段地合成的DNA单链小片段 (1000~2000bp)。 DNA聚合酶Ⅰ：切除RNA引物（5’-3’外切酶活性） 填补缺口（ 5’-3’聚合酶活性） 连接酶：连接冈崎片段形成一条连续的单链。 ⑶ DNA复制的终止 复制原点对面600kb终止区 Ter序列（终止陷阱）:引起复制终止的序列。 终止子利用物质Tus可识别并结合形成Ter –Tus复合物，阻止解旋酶的解旋，从而阻断复制 4. 真核生物DNA复制的特点 1-5kb/min 100kb/min 复制速度 有 无 端粒酶 聚合酶δ控制前导链 聚合酶α控制后随链 聚合酶Ⅲ 前导链与滞后链的合成 100-150bp 1000-2000bp 冈崎片段长度 10bp 10-60bp RNA引物长度 多个（自主复制序列ARS） 单个 复制起点 细胞周期S期 整个细胞生长过程 DNA合成的时期 真核生物 原核