黄豆铁蛋白提取新方法及其与豌豆铁蛋白活性比较.pdfVIP

Vol. 30 No.l0 高等学校化学学报 2(朋年10 月 CHEMICAL JOURNAL OF CHINESE UNIVER.iITlES 2∞3 -2∞8 黄豆铁蛋白提取新方法及其与 豌豆铁蛋白活性比较 胡 菊，廖夏云，邓建军，胡小松，赵广华 (中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 1(削83) 摘要 铁蛋白是广泛存在于动物、微生物及植物体中的一种铁贮藏蛋白，具有去除二价铁的毒性以及调节 机体细胞铁代谢平衡的作用.本文以黄豆种子为原料，开发出黄豆铁蛋白提取新方法，即将黄豆粗提液在 55 c下加热 15 min ，再将冷却后的上清液分别用5∞ mmoVL MgCl2 和7∞ mmol/L 拧橡酸三纳进行盐析.离 心得到的铁蛋白相提液经透析后，用 DEAE-cellulose 弱阴离子交换层析和Sephacryl 5-3∞凝胶过滤层析进一 步分离，得到电泳纯的铁蛋白. Native电泳测得分子量约为56仪则， SD5电泳结果表明，黄豆铁 蛋白含有两种亚基，分子量分别为28C削和265∞.活性研究显示，黄豆铁蛋白与豌豆铁蛋白铁氧化沉淀和 还原释放反应的活性明显不同. 关键词 黄豆;铁蛋白:纯化;活性鉴定 中图分类号 0629 文献标识码 A 文章编号 0251 -0790 (2侃J9) 10-2∞3，，(汤 铁是人体必需的微量元素，在新陈代谢过程中发挥着极其重要的作用.铁不仅是多种化合物的组 分，还和参与代谢的多种活性酶有关，同时在一定程度上影响机体的免疫机能.铁可以形成血红素 ( Heme) 、铁硫原子簇(lron-sulfur clusters) 以及其它一些铁化合物，这使得它在光合作用、呼吸作用、 氮的固定、蛋白质和核酸的合成等诸多生理代谢过程扮演着举足轻重的角色，成为动物、植物以及微 生物生长发青所必需的营养元素之一(1 -3J 铁蛋白广泛存在于动物、植物和微生物中.当细胞内二价铁离子含量高时，铁蛋白通过它的亚铁 氧化还原中心，在氧气的帮助下，将其催化氧化生成无毒的三价铁储藏在它的内部. 1 分子铁蛋白最 多可储存45∞个三价铁，这个特点是铁蛋白与其它酶最大的不同之处;当细胞需要铁时，铁蛋白在还 原刑的帮助下，将三价铁还原为二价铁离子从其内部释放出来，以供其它蛋白质合成利用，所以铁蛋 白在细胞内具有去除二价铁离子的毒性以及调节铁代谢平衡的双重作用[4-8] 国外对于铁蛋白的研究主要集中在动物铁蛋白和微生物铁蛋白，而对于植物铁蛋白的研究很少. 本文对黄豆铁蛋白分离纯化和活性的研究不仅可以丰富并拓展铁蛋白的基础理论研究，而且能够为新 型天然补铁功能食品的开发提供理论依据和技术支撑. 1 实验部分 1.1 试剂与仪器 黄豆(原产地东北) ，购于北京中化石联贸易中心;聚乙烯毗咯炕嗣(Polyvinylpyrrolidone. PVP) , Amresco 进口分装; DEAE-cellulose 和 5ephacrγ1 5-300 (聚丙烯酷股葡聚精凝胶)为 GE-Healthcare Bio- 5ciences AB 公司产品; NaN Biodee Biotechnology 公司产品;其它试剂均为国产分析纯. 为 3 台式离心机(TDLδA ，上海安亭科技仪器厂) ;常压生物层析系统( Bio-RAD Biologic 四，美国 BIO­ RAD 公司) ;高速冷冻离心机(日本日立公司) ;超滤装置( 5tirred Cell 8050 ，美国 Minipore 公司) ;溶剂 过滤器(口。lB ，北京友仪四方科技发展有限公司) ;超纯水器(2(沈阳D ，北京长风仪器仪表公司) ;稳 收稿日期: 2009()2-16. 基金项目:国家八