植物花粉和花药培养.ppt

包括蔗糖、麦芽糖、纤维二糖、葡萄糖、果糖、海藻糖等。 不同作物所需最适的碳源种类及浓度的所差异。 在辣椒花药培养中以6%的蔗糖浓度对胚状体的诱导率为最高。 在番茄花药培养中需要量高达14％。 其原因是花粉母细胞的渗透压比花丝等体细胞高的缘故，即高浓度的蔗糖不利于药壁、花丝等体细胞的生长，而利于花粉的生长。 一般认为单子叶植物比双子叶植物需糖的浓度要高。 玉米中蔗糖效果最好；而麦类作物中，麦芽糖似乎为最好的碳源。 较高浓度蔗糖可诱导花粉形成愈伤组织； 较低 浓度蔗糖可使愈伤组织分化成苗。 2.碳源 3、激素 细胞分裂素可促进胚状体形成； 生长素可诱导愈伤组织形成。 细胞分裂素与生长素比值高时可诱导愈伤组织分化苗 4、氨基酸 5、活性碳 6、pH （六）培养条件 1、温度 物种间有差异，培养温度在25～28℃左右 2、光照 光暗交替培养，每天12～18h的光照，光照强度2000～10000lx。 3、植板密度 植板密度与花培效率有很大的相关性。5×103到2×104／ml密度均能有效培养。一般来说，足够数量的、但相对低密度的小孢子浓度有利于小孢子竞争营养、氧气、细胞分裂的空间，从则有利于胚状体发生。 花药组织的存在对小孢子的胚性分裂具有明显的促进作用。但花药壁损伤会释放有毒物质影响小雄核的发育。 （七）花药壁因素 第四节 单倍体植株鉴定和染色体加倍 一、倍性鉴定 二、染色体加倍 一、倍性鉴定 （为什么要进行倍性鉴定？） 1、染色体直接计数法 通常取根尖、茎尖等分生组织区进行制片，直接计数染色体数目。 2、间接鉴定 （1）扫描细胞光度仪鉴定（流式细胞仪） 主要测定叶片单个细胞中DNA的含量确定细胞的倍性，材料的使用量可少到1cm2。 （2）细胞形态学鉴定法 叶片保卫细胞大小、单位面积上的气孔数及保卫细胞中叶绿体的大小和数目与倍性具有高度的相关性。 （3）植株形态学鉴定法 单倍体植株瘦弱，叶片窄小，花小柱头长，花粉粒小，不结实。 （4）杂交鉴定法 自交或测交鉴定，看后代分离情况确定二倍体植株是来自小孢子还是体细胞。 （5）分子标记鉴定 包括生化标记（如同工酶标记）和分子标记（如RFLP、RAPD、AFLP等） 二、染色体加倍 （为什么要进行加倍？） 1.自然加倍: 花粉细胞核有丝分裂或核融合可自然加倍，其优点是不会出现畸形，缺点是随机性强，难以掌握和利用。 2.人工加倍：用秋水仙素溶液浸苗、处理愈伤组织和用含0.4%秋水仙素的羊毛脂涂抹单倍体植株的顶芽、腋芽，可得到能结实的二倍体植株。 3.愈伤组织反复继代培养，可得到二倍体植株。 将单倍体植株（孢子体）的茎段、叶柄、根茎切下，置适宜的培养基上使之发生愈伤组织，反复继代后再将愈伤组织转移到分化培养基上，即可获得较多二倍体植株。由于单倍体愈伤组织在培养过程中会有一定高频率的核内有丝分裂，从而形成二倍体细胞，分化出纯合的二倍体植株。 第一节 花药和花粉培养技术 单倍体植物天然发生的途径： 孤雌生殖 孤雄生殖 无配子生殖 也称单性生殖，即卵不经过受精也能发育成正常的新个体 配子体可以不经过配子的结合，而直接产生孢子体的，这种现象叫做无配子生殖 花药和花粉培养基本流程： 预处理花药（物理或生理逆境） 收集具胚性小孢子的花药，或离心收集胚性小孢子 培养（充足的营养、合适的温光、或条件培养）形成胚状体 胚状体转移至固化培养基上”萌发”形成小植株。 选择合适的供体植株（F1？） 倍性鉴定或染色体加倍 花药培养脱毒 1974年日本：花药培养可以脱除草莓病毒； 花药采取时期 单核期：花蕾4-6mm，花药1mm 花药诱导愈伤组织培养基 MS+IAA4mg/L+BA2mg/L+KT2mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 增殖分化培养基 MS+GA1mg/L+IBA0.2mg/L+BA1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L 生根培养基 1/2MS+IBA0.2mg/L+活性炭3g/L+蔗糖20g+琼脂7g/L 第一节 花药和花粉培养技术 草莓花药愈伤组织,再生植株,花药植株 第一节 花药和花粉培养技术 　 孢子有大小两型,其大形者称为大孢子 胚囊细胞 embryo－sac cell 是种子植物的大孢子，是由胚囊母细胞减数分裂形成的单倍的细胞，相当于苔藓植物和蕨类植物的大孢子 被子植物和裸子植物花药内的花粉四分体也称为小孢子. 孢子是生物所产生的一种有繁殖或休眠作用的细胞，能直接发育成新个体。孢子一般微小，单细胞。 由于它的性状不同，发生过程和结构的差异而有种种名称。 生物通过无性生殖