分散泛菌蔗糖异构酶在大肠杆菌中的表达及发酵优化.PDFVIP

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2017-05-26 发布于湖北
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分散泛菌蔗糖异构酶在大肠杆菌中的表达及发酵优化.PDF

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分散泛菌蔗糖异构酶在大肠杆菌中的表达及发酵优化

1070 生物工程学报刘军彤等/分散泛菌蔗糖异构酶在大肠杆菌中的表达及发酵优化 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn August 25, 2016, 32(8): 1070−1080 DOI: 10.13345/j.cjb.150487 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术 1,2 1,2 1,2 刘军彤，吴敬，陈晟 1 214122 2 214122 , , . . , 2016, 32(8): 1070–1080. Liu JT, Wu J, Chen S. Expression and production optimization of sucrose isomerase from Pantoea dispersa in Escherichia coli. Chin J Biotech, 2016, 32(8): 1070–1080. 摘要: 为了提高分散泛菌Pantoea dispersa UQ68J 来源的蔗糖异构酶产量，研究了不同信号肽及发酵条件对蔗糖异构酶在大肠杆菌中重组表达的影响。将携带天然信号肽的蔗糖异构酶基因优化后，转入大肠杆菌 Escherichia coli BL21 (DE3) 构建重组表达菌株——ORI 菌株，摇瓶发酵总酶活和胞外酶活分别为85 U/mL 、 65 U/mL 。从天然信号肽开始第22 位氨基酸作为成熟蛋白的起始，连接PelB 或OmpA 信号肽构建P22 和O22 菌株，其中P22 菌株发酵总酶活提高至 138 U/mL，是ORI 菌株总酶活的 1.6 倍；而 O22 菌株发酵总酶活和 ORI 菌株无明显差别。采用3.0 g/L 的乳糖诱导，P22 菌株的蔗糖异构酶总酶活提高至168 U/mL。在3 L 发酵罐中，研究甘氨酸浓度和诱导时间对蔗糖异构酶分泌的影响，当补加 0.5%甘氨酸，DCW 为 18 g/L (OD600=30) 开始诱导，P22 菌株的蔗糖异构酶胞外酶活最高达1 981 U/mL，同时蔗糖异构酶总酶活达到2 640 U/mL ，是已报道大肠杆菌重组表达蔗糖异构酶的最高水平。 : 蔗糖异构酶，信号肽，发酵优化 Received: November 17, 2015; Accepted: January 19, 2016 Supported by: National Science Fund for Distinguished Young Scholars (No. , The Project of Outstanding Scientific and Technological Innovation Group of Jiangsu Province (Jing Wu, 111 Project) (No. 111-2-06), Natural Science Foundation of Jiangsu Province (No. B, The Fundamental Research Funds for the Central Universities (No. JUSRP51304A). Corresponding author: Sheng Chen. Tel/Fax: +86-510 E-mail: chensheng@ (No. (111 )