放射免疫分析1-检验本科a.pptVIP

放射免疫分析(1) 核医学科江旭峰 历 史 1959年Berson SA和Yalow RS首先报导人体血浆内源性胰岛素的免疫分析 1977年荣获诺贝尔奖 Yalow博士学术报告（1984） Yalow博士来院访问（1984） Berson,Yalow RSImmunoassay of human Plasma Endogeneous Insulin nature J. Clinical Investigation 我国放免发展 初创时期：60年代初期至1975年建立胰岛素、甲种胎儿球蛋白、绒毛膜促性腺激素和肾素活性等方法。 普及推广时期：1975年~1985年，甲状腺激素、甾体激素、肿瘤标志物、生殖激素和肝炎相关抗原得到普遍应用 提高发展时期：1985年~1995年单克隆抗体，固相技术的出现推进了免疫放射分析（IRMA）技术的发展，甲状腺激素、肿瘤标志物等药合系列化，药合生产点和放免检测中心争相建立，质量控制得到发展。 面临挑战期：1995年以来，与放免分析相同原理的非同位素免疫分析，或称非放射性免疫分析，得到快速发展，这是放免分析面临的一大挑战 瑞金核医学科发展史 国内外首创甲胎蛋白放免分析 肝癌诊断和研究作重要贡献 1982 国内首创癌胚原放免分析 结直肠癌及消化道肿瘤的诊断和研究作出重要贡献 1985 获上海市科学技术进步二等奖 1985 二医病生教研室协作完成 国内首创β-血栓球蛋白（β-TG） 血小板IV（PF4）放免分析 1989 获上海市科学技术进步二等奖 标记免疫分析分类 以结合物替代抗体 1．竞争蛋白结合分析（CPBA）以可与激素结合的蛋白为结合物，如甲状腺结合球蛋白（TPG）替代T4抗体测定T4，皮质醇结合蛋白（CBP）为结合物测定皮质醇。 2．放射受体分析（RRA）以红细胞（胰岛素受体）或肝细胞膜（生长激素受体）为结合物分别测定胰岛素和生长激素。 3．放射酶分析（REA）以特异酶为结合物，如叶酸还原酶测定叶酸 以标记抗体替代标记抗原 以夹心法为代表的免疫放射分析法简称IRMA是以标记抗体和固相抗体与待侧抗原的非竞争结合反应 以非同位素物质替代放射性核素标记抗原配体或抗体（其他结合物）。有以下几种： 1．酶免疫分析 2．荧光免疫分析 3．化学发光分析 4．金属免疫分析 非同位素标记的条件 用非同位素物质替代放射性核素应具备以下条件 灵敏度：灵敏度达到10-15--10-18M/L 结合特异性 均一性。 稳定性 环境因素的不敏感性，要像放免分析一样标记物质不变或少受样本中缓冲液，湿度或PH影响 临床应用：要求自动化和实用性强，便于门诊及急诊使用 安全性: 无毒、安全、无危险、无废物处理问题。 应用性：标记反应温和，结果理想和重复性好。 放射免疫分析 原理 基本原理是竞争结合反应，以RIA为例 *Ag+Ab=*AgAb+*Ag + Ag ?? AgAb + Ag 结论 * AgAb复合物的量取决于Ag的量 Ag量越大， * AgAb量越少 Ag量越小， * AgAb量越大 测量* AgAb量或测量多余* Ag量可推算出Ag量 二、测量步骤 恒量的* Ag、Ab加入反应管中 加入待测样品、或标准品（已知浓度） 37℃或4 ℃温育 加入分离剂分离结合及游离部分 测定以总放射性为分母，测定* AgAb 为分子，计算结合%，以结合率为纵坐标，浓度为坐标，制作标准曲线 待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度 放免分析基本条件 用于放免分析检测的试剂组成各种试剂合，简称药合（Kit） 标记抗原或配体：用于标记的放射性核素有125I、131I、14C、3H，以125I为最常用，试剂瓶上贴有放射性标签。 特异抗体或其结合物：多克隆或单克隆抗体，后者的特异性有了进一步提高。 分离剂：用于分离B和F，有活性碳，饱和硫酸胺，双抗体，聚乙二醇等或塑料球、管、磁性颗粒等固相分离技术。 步骤 标准曲线或剂量--反应曲线的建立 定量的标记抗原和稀释抗体与各种不同浓度的标准