实验二细菌的染色和.PDFVIP

实验二 细菌的染色和 细菌细胞构造的观察 目的要求 染色剂和染色的原理 实验材料 实验程序 思考题 目的要求 学习微生物涂片 掌握细菌的一般染色法和革兰氏染色 进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术 观察和识别细菌细胞的特殊构造 染色剂和染色原理 微生物染色的基本原理: 是借助物理和化学因素的作用而进行 的。物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸 附作用等。化学因素如：正负离子之间的相互吸引等。 染色剂: 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型： 1. 酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。 2. 碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶 紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。 3. 中性（复合）染料：如伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa 染料等 （常用于细胞核染色）。 4. 单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物， 不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类（Sudan b)的染料。 染色剂和染色原理: 微生物染色常用染料 实验材料 涂片染色用的细菌培养物 １.大肠杆菌 （Escherichia coli) 24h的斜面培养物。 ２.枯草杆菌 （Bacillus subtilis) 12 16h的斜面培养物。 载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火 柴、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。 示范片 １.枯草杆菌 （Bacillus subtilis)的芽孢； ２.胶质芽孢杆菌 （Bacillus mucillaginosus）的荚膜； ３.枯草芽孢杆菌的鞭毛。 实验程序: （细菌染色的方法和步骤） 细菌染色的方法: １. 单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察 微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴 别微生物以及它的特殊构造等。 ２. 复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色， 有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常 用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色 法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。 染色技术的一般过程 涂片 干燥 固定 染色 媒染 脱色 复染 水洗 干燥 镜检 实验程序: （简单染色的方法和步骤） 简单染色法 （一般染色法） １.菌种：细菌培养物 ２.涂片 ３.干燥：自然气干或酒精灯 高处微微加热。 ４固定 ５.染色：在整个涂面上滴加 齐氏石炭酸复红，染色１分 钟 。 ６.水洗：倾去染液，用自来 水细流冲洗至流下的水中无染 料颜色为止。 ７干燥：空气中自然干燥。８ 镜检：在油镜下观察牙垢中的 各种细菌形态并绘图。 实验程序： （革兰氏染色的方法和步骤） 革兰氏 （Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草 酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾 去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液 冲去残水，而后用其覆盖涂面1 分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95% 酒精进行脱色约30秒，后立即用 流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染1 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。 实验程序： （荚膜染色的方法和步骤） 荚膜染色法 （示范）： 荚膜薄，易变形，因此在涂片过程中不能