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KLF4、KLF6在胃癌中的表达及临床意义 　　作者：许越平,李勇,范立侨,赵群,王力利　　作者单位：河北医科大学第四医院外三科，河北 石家庄 050011 　　【摘要】目的探讨KLF4、KLF6在胃癌组织中的表达与胃癌临床生物学行为的关系及意义。方法RTPCR技术检测36例胃癌手术切除标本癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜内KLF4、KLF6的表达，并分析其与患者临床病理特征的关系，采用SPSS11.5软件进行统计学处理。结果 胃癌组织中KLF4、KLF6的表达明显低于正常组织(P0.05);胃癌组织中KLF4的表达在无淋巴结转移组中显著高于淋巴结转移组(P0.05); KLF6的表达随分化程度的增加，TNM分期的增加而显著降低(P0.05)，无淋巴结转移组显著高于淋巴结转移组(P0.05，P0.01)。结论 KLF4、KLF6在胃癌组织中低表达可能与胃癌的发生、发展、转移、预后有关。 　　【关键词】 胃肿瘤;KLF4;KLF6;逆转录聚合酶链反应 　　Kruppe样因子4(KLF4)是KLF家族C2H2型锌指转录因子，在胃肠道中呈现高度表达。人KLF4基因定位于染色体9q31，编码一个由470个氨基酸组成的蛋白质。有研究显示，KLF4在结肠癌〔1〕、食管癌〔2〕组织中明显低表达。KLF6基因定位于人类染色体10p15，有5个外显子和4个内含子。有报道KLF6与肿瘤细胞多种生物学行为有关〔3〕。但迄今关于KLF4、KLF6在胃癌中的表达情况尚无报道。本研究采用RTPCR方法检测胃癌组织、癌旁组织及正常胃黏膜中KLF4、KLF6的表达，及其与肿瘤临床病理学行为的关系，并对二者在胃癌中的意义进行了探讨。 　　1 材料与方法 　　1.1 研究对象 　　河北医科大学第四医院2007年1～7月手术切除胃癌标本36例，所有标本均经术后苏木素伊红(HE)染色病理证实，临床资料完整，按全国胃癌诊疗规范统计分析临床资料并行TNM分期，术前均未进行治疗。其中男32例，女4例;年龄22～80岁，中位年龄59岁;肿瘤切除后立即无菌条件下取癌组织、癌旁组织(距癌边缘2 cm)及正常组织(距癌肿边缘5 cm以上)约1.0×0.5×0.5 cm3，-80℃保存备检。 　　1.2 RTPCR法测定KLF4、KLF6 mRNA表达 　　Trizol 和GoTaq绿色体系购自美国Promega公司;逆转录试剂盒购自美国Fermentas公司;KLF4、KLF6及内参照3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的RTPCR特异引物序列均由上海生物工程有限公司提供。组织总RNA提取、逆转录合成cDNA后PCR扩增。引物序列如下：KLF4上游：5′CCATAATTCCTGCCCGAT3′;下游：5′CCAAGCTTCCAAAAGCCTCTTCATGTG3′;KLF6上游5′CGAGCCCTGCTATGTTTC3′;下游:5′ CATCGCCATTTCCCTTGT3′;GAPDH上游：5′ACAGTCCATGCCATCACTGCC3′;下游：5′GCCTGCTTCACCACCTTCTTG3′。反应体系：GoTaq绿色体系12.5 Μl;上、下游引物各2.0 Μl;RNA模板2.0 Μl;DEPC水6.5 Μl。KLF4、KLF6 PCR反应条件：预变性95℃5 min、94℃变性30 s、退火30 s、70℃延伸1 min、共35个循环,最后72℃延伸10 min;KLF4退火温度58℃，KLF6退火温度52℃。取8 Μl PCR产物置于1.6%琼脂糖凝胶中，80 V电压电泳30 min，通过凝胶成像系统进行电泳条带扫描，以GAPDH作为内参照物。 　　1.3 统计学分析 　　采用SPSS11.5统计软件，两组间显著性检验采用独立样本t检验;三组以上组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)，相关分析采用Person法。 　　2 结 果 　　2.1 KLF4、KLF6 mRNA在各组织中的表达情况 　　胃癌组织中KLF4 mRNA的表达明显低于正常组织(P0.05)，癌旁组织和正常组织表达无显著性差异(P0.05);KLF6 mRNA在胃癌组织中的表达明显低于正常组织(P0.05);且癌旁组织中的表达也明显低于正常组织(P0.05)。见表1，图1、2。M:Marker;T：胃癌组织;P：癌旁组织;N：正常组织图1 KLF4、KLF6 mRNA在胃癌组织、癌旁组织和正常组中的表达表1 胃癌组织、癌旁、正常组织中 KLF4和KLF6 mRNA的表达表2 KLF4和KLF6 mRNA的表达与胃癌　　临床病理特征的关系 　　2.2 KLF4、KLF6 mRNA的