丙泊酚对大鼠肾脏热缺血再灌注损伤的影响.docVIP

丙泊酚对大鼠肾脏热缺血/再灌注损伤的影响 首都医科大学附属北京友谊医院麻醉科100050 李锦 李树人 目的 本研究旨在建立大鼠肾脏缺血/再灌注损伤模型，在体静脉输注全麻药丙泊酚，在不同时间点运用不同方法进行研究来探讨丙泊酚是否有肾保护及其机制。方法 选择成年封闭群SD雄性大鼠，切除右肾，依据对左侧肾脏的不同处理随机分为：Con组—假手术组（n=26）；IR组—肾脏缺血再灌注组（夹闭肾蒂45min后血流再通，n=35）；IR+P组—肾脏缺血/再灌注丙泊酚组（n=38），在缺血前15min到再灌注后15min持续输注丙泊酚1mg/kg/min，对照组用同量的乳酸林格液。每组建立静脉通路后输注乳酸林格液5ml/kg。术中记录缺血前30min，缺血前10min(丙泊酚用药后5min)，缺血10min、25min、40min，再灌注即刻，再灌注20min，再灌注30min不同时间点的平均动脉压的变化；多普勒血流超声仪进行肾脏血流速度的测定，时间点分别选在阻断肾蒂前30min, 10min及恢复血流灌注后5min, 20min, 30min；取再灌的0，3，12，24，72hour左侧肾脏，取肾同时采血，肾组织行普通光镜、TUNEL形态学动态观察损伤严重程度，检测0，3，12，24，72hr血清中尿素氮（BUN）、肌酐（Creatine）、丙二醛（MDA）、超氧化物崎化酶（SOD）的浓度或活力的变化，免疫组织化学检测3，24，72hr凋亡相关蛋白Bcl-2，Bax，Caspase 3，细胞色素C的表达。结果（1）三组动物术中血流动力学较稳定，肾脏缺血后平均动脉压升高（P0.05），IR+P组见丙泊酚用药后平均动脉压下降（P0.05），在同一时间点IR和IR+P比较有显著性差异（P0.05），但全过程IR和IR+P组间比较无显著差异（P0.05）；（2）IR组肾静脉血流速度在血管开放后比缺血前低（P0.05），恢复血流5min与30min相比，无统计学差异（P0.05）；IR+P组丙泊酚用药前后肾血流速度有显著性差异（P0.05）；（3）IR组尿素氮（BUN），肌酐（Creatine），丙二醛（MDA），超氧化物崎化酶（SOD）的浓度或活力与Con组、IR+P组相比有显著性差异（P0.05），IR组、IR+P组组间比较24hr，12hr，3hr与0hr，72hr有显著性差异（P0.05）；（4）肾组织光镜形态学可观察到肾脏缺血/再灌注引起肾脏损害，程度依次为近曲小管、远曲小管、集合管、肾小球；TUNEL的凋亡指数由高到低依次为近曲小管、远曲小管，肾小球未见表达；IR组和IR+P组比较有显著性差异（P0.05），IR组、IR+P组组内时间点损害依次为24hr，12hr，3hr，0hr和72hr；（5）免疫组化图像分析观察到IR组与Con组相比，Bax ，Caspase 3，细胞色素C表达增加，Bcl-2表达未见显著变化，IR+P组与IR组比较，前者促凋亡蛋白表达下降（Bax ，Caspase 3，细胞色素C），保护性抑凋亡蛋白Bcl-2表达增高（P0.05）。结论（1）大鼠肾脏缺血/再灌注损伤引起一系列血流动力学、血清学、组织形态学、凋亡相关蛋白表达的改变；（2）丙泊酚1mg/kg/min实验剂量可影响平均动脉压，改变肾血流量；（3）丙泊酚可保护大鼠肾脏缺血/再灌注损伤，减轻肾功能的损害，具抗氧化损伤作用；（4）丙泊酚对肾脏缺血/再灌注损伤引起的细胞凋亡具有保护作用，可抑制促凋亡蛋白Bax，Caspase 3，Cytochrome C的表达，不降低抑凋亡蛋白Bcl-2的表达，影响细胞凋亡的内源性线粒体通路途径。 关键词 丙泊酚 肾脏缺血/再灌注 细胞凋亡 丙泊酚对大鼠移植肾脏细胞凋亡通路的影响（摘要） 首都医科大学附属北京友谊医院麻醉科100050 李 锦 李树人 目的 建立大鼠肾移植的缺血/再灌注损伤模型，术中静脉输注丙泊酚，监测术中血流动力学变化，观察供体肾脏在供体和受体的肾静脉血流速度，术后获取移植肾脏，研究线粒体内源性凋亡通路中关键蛋白的表达，验证丙泊酚抑凋亡的肾保护作用。 方法 选择成年近交系Lewis雄性大鼠，供体按常规取肾方式迅速获得左肾，入冷灌注保存液中保存约一小时，受体切除左肾，供肾的腹主动脉、腔静脉分别与受体的腹主动脉、腔静脉以端侧吻合，供体输尿管膀胱带瓣与受体膀胱侧侧吻合。分组：对照组―假手术组（n=8），肾移植组（n=8），肾移植＋丙泊酚组（n=8）。术中记录供肾在供体和在受体血管再通时的供肾静脉血流速度，进行比较；术后一天获取移植肾脏，用蛋白免疫印迹方法（Western Blot）检测凋亡相关蛋白Bcl-2，Bax，Caspase 3，细胞色素C的表达。 结果 （1）近交系大鼠异体肾移植供肾在