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分子印迹技术在固相萃取与高效液相色谱中的应用 摘要：与传统固相萃取材料相比，分子印迹聚合物（MIPs）具有高选择性、稳定性好、可重复使用等优点，可以在复杂的样品中作为富集分离的一种前处理技术。分子印迹用于固相萃取（SPE）和固相微萃取（SPME）与高效液相色谱（HPLC）联用，可以用于检测复杂样品中的目标物。着重介绍了分子印迹-固相萃取在环境、食品、生物医药等领域中的应用 关键词:分子印迹技术；固相萃取；高效液相色谱；综述 1. 分子印迹技术和固相萃取的原理 1.1　分子印迹技术 分子印迹技术(MIT)是近十几年来发展起来的一门边缘科学技术,是指制备对某一特定目标分子具有特异选择性的聚合物-分子印迹聚合物(MIPs)的过程,它结合了高分子化学、生物化学等学科,作为一种新型高效的分离技术,具有空间专一识别性。 1.2　固相萃取 固相萃取(SPE)是利用固体吸附剂对液体试样中各组分吸附力差异而实现分离的。固相吸附剂对目标组分的选择性越高,则分离效率越高。混合液通过吸附柱时,目标成分被吸附剂吸附,然后再利用洗脱液洗脱或加热解析,达到富集目标化合物的目的。根据目标化合物的种类、性质等选择合适的固相萃取剂和洗脱液及其它优化条件后,可以一步完成萃取、富集、净化等操作,并可以与高效液相色谱、气相色谱等联用。固相萃取克服了一般液液萃取及一般层析柱的缺点。萃取过程简单快速、节省溶剂、重现性好、回收率高、减少了有机溶剂对操作人员和环境的影响。 2. 分子印迹固相萃取高效液相色谱 2.1 SPE-HPLC 联用技术 MIPs 用作 SPE 的填料用来分离富集复杂样品中的分析物，具有以下优点：（1）化学和物理稳定性。MIPs 机械强度高，耐高温、耐高压，能抵抗酸、碱、高浓度离子、有机溶剂的作用，在复杂化学环境中能保持自身稳定性（2）能够反复使用。已由文献证明 MIPs 反复使用 300 次之后印迹能力也未发生衰减（3）稳定性好。有报道称保存 8 个月之后其性能也不会发生改变Sellergren 等首先报道了 MIP - SPE（MISPE），应用合成的戊烷分子印迹聚合物填充小柱，成功分离了尿中的潘他米丁，不用色谱分析便直接在解吸附后检测出了结果。其后，更多关于 MISPE 的研究在不同领域得到了发展。具体固相萃取可以分为离线固相萃取和在线固相萃取两种方法。 2.2 在线固相萃取 为了克服离线 MISPE 的缺点，发展出了在线MISPE 方法。这种方法实现了 MISPE 与分析系统的自动化操作，由此避免了预富集和分析步骤间的样品操作，因此减弱了分析物的损失，被污染的危险，增加了灵敏度和重现性。同时，由于 MISPE 过程实现了自动化，可以大大减少处理样品的时间。另外，整个样品提取在分析柱中进行，所以样品的用量可以更少。一般采用普通的六通阀与 HPLC 联用，填料装于不锈钢小柱中，以适应 HPLC 系统的高压 2.3　离线模式 目前,MISPE采用最多的还是离线模式,这种模式操作简单,可选用的溶剂和添加剂较多,并且不用考虑它们对分析的影响,因此,有更高的富集率和选择性。其不足在于检测时间长,会相应增大误差。离线模式一般分为4个步骤:平衡、上样、清洗和洗脱。 2.4.1 固相萃取中分子印迹聚合物的制备 分子印迹聚合物的制备通常包括以下几个步骤:功能单体与模板分子的功能基团在适当的条件下可逆结合,形成复合物;加入交联剂,使其与功能单体聚合,形成的聚合物将模板分子包埋在内;用物理和化学方法,将模板分子从聚合物中洗脱,以获得具有识别功能并与之相匹配的三维空穴. 2.4.2模板分子与功能单体的相互作用 模板分子与功能单体之间的相互作用也可称之为印迹,主要有共价印迹、非共价印迹和半共价印迹3种方式。非共价印迹过程中,模板分子和功能单体通过氢键、静电相互作用、范德华力、疏水作用等非共价键作用结合形成复合物。此种方式形成速率快,也容易从复合物中去除模板分子,有较广泛的模板分子选择范围,故有较大应用潜力。但是,此种方式印迹制备的分子印迹聚合物(MIPs)结合位点不均一,容易引起模板分子渗漏现象。共价印迹在固相萃取中很少应用。第三种是半共价印迹,这种方式是分子印迹聚合物用共价键印迹制备,而分子印迹聚合物与待测物质之间仅仅依靠非共价键作用来结合,这样,即能发挥它们的特长,又克服了彼此的不足 3 . 分子印迹固相萃取的应用 3.1　环境试样分析中的应用 环境试样的分析是环境保护中的一个重要环节,起着重要的作用。MISPE作为一种新的高效分离方法,在环境样品的分析中已得到广泛应用。Antonio等制备了24种分子印迹聚合物,用于土壤中BPA的固相萃取研究。Zhang Jiang-hua等用沉淀聚合法制备分子印迹聚合物,并在优化的条件下探讨了人血清、猪尿、自来水和虾等