galliosプレゼン资料通常版.pptVIP

* スライドの通り FITCから発生したパルスがFL2の検出器にも入ってしまう。 * 一般には単染色、例えばFITCのみがポジティブになるはずのFITC単染色を測定して、FITC以外がポジティブになった場合（集団がダブルポジティブ領域にプロット）それを補正する。　マルチカラー測定の場合、他の蛍光も同様に補正していく。 FITC/PEの2カラーの場合はお互いへの漏れ込みを補正するだけでいいが、FITC/PE/ECDの3カラーの場合は、FITCのPEへの漏れ込みとECDへの漏れ込みをチェックしなければいけないと共に、PEのFITCへの漏れ込みとECDへの漏れ込み、ECDのFITCへの漏れ込みとPEへの漏れ込みをチェックしなければならないので、2カラーから３、4カラーと使用するカラーが増えるごとに補正は複雑になる。 漏れ込みが起こる理由：　蛍光波長の分布図 ３．機器設定操作 ～ コンペンセーション(蛍光の漏れこみ )～ 目的外のセンサーへの入光 ３．機器設定操作 ～ コンペンセーション(蛍光の漏れこみ )～ 蛍光補正値調整の目安 ＋／＋領域　　　内に入らない 平均蛍光強度（Mean Yまたは Mean X） ポピュレーションの見た目のバランス FL2-%FL1 FL1-%FL2 FITC（FL1 Log）　X軸　 PE（FL2 Log）　Y軸　 ３．機器設定操作 ～ コンペンセーション(蛍光の漏れこみ )～ ＦＩＴＣの単染色サンプルでＦＬ２への漏れこみを補正 ３．機器設定操作 ～コンペンセーション(蛍光の漏れこみ )～ FITCだけに染色されている細胞が、FITCとPEの両方に染色されているように表示されてしまっている フローサイトメーターの応用 様々なアプリケーションが可能 1．DNA分析～ 原理 ～ DNAに結合する蛍光色素量は、DNA含量に比例 DNA量が多ければ蛍光は強い ＝4N は、2N の２倍量なので 色素も２倍量結合 ＝4N の蛍光強度は 2N の２倍 DNAに結合する蛍光色素を使用。 １．DNA分析～ 他の色素 ～ 色素名 励起 ( nm ) 蛍光 ( nm ) コメント PI 488 617 1 カラー染色体、 DNA セルサイクル、 死細胞除去 SYTO9 488 500 生細胞染色 SYTO16 488 518 7 - AAD 488 647 G - C 特異的、死細胞除去、 DNA セルサイクル LDS751 543 712 生細胞染色、死細胞除去 生細胞染色 １．DNA分析～ 他の色素 ～ １．DNA分析～ PI染色原理 ～ PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI PI 生細胞は膜に穴が開いていない