动物细胞工程常用的技术手段u用.pptVIP

动物细胞培养过程中几个重要的概念 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、微量元素等） 3、温度和PH 温度36.5+0.5度，pH7.2～7.4 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）  动物细胞特点？ 分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性 根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达? 胚胎移植－动物幼体产出 概率＜10％ 克隆动物存在着健康问题 克隆动物的食品安全性问题存在争议 1、定义：指用两个或多个动物细胞融合成一个细胞的过程。 动物细胞融合 化学法：聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法：电激融合 生物法：灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的） 4、动物细胞融合技术的应用 细胞融合技术突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。 发展起来的杂交瘤技术，制备单克隆抗体新途径。 人们获得抗体的传统方法是? 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体 这种方法的缺点是什么? 效率低，产量有限，纯度低，动物抗体注入人体可能产生严重的过敏反应。 运用已学知识，设想怎样获得单一类型的抗体？ 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来产生单一类型的抗体呢？ B淋巴细胞在体外不能无限增殖。 单克隆抗体的制备—极富创造性的方案 将能够产生特定抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。 米尔斯坦(阿根廷)和科勒(德国)因此在1984年获诺贝尔奖。 作为诊断试剂：在临床生化诊断、病理组织定位、体内肿瘤的定位等,与常规抗体相比,具有准确、高效、简易、快速特点. 用于治疗疾病和运载药物： 主要用于癌症治疗。 生物导弹：抗癌细胞的单克隆抗体+放射性同位素+化学药物或细胞毒素。（单克隆抗体：导向。准确找到癌细胞位置，原位杀死癌细胞。） 归纳: 1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.取卵母细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作；含有激发细胞核全能性的物质 3.严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状 ◆特别注意：克隆动物性状与供体动物完全一样吗？ 不可能！供体动物只提供细胞核，而细胞质中的遗传物质（如线粒体DNA）来自于受体卵母细胞. 生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境的影响。 6.体细胞核移植技术的应用前景 看书P49-50页 1）加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 2）保护濒危物种，增加存活数量 3）克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 4）可以作为异种移植的供体，可以用于组织器官的移植 7.体细胞核移植技术存在的问题 看书P49-50页 一、动物细胞融合 ◆杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。 细胞杂交 2、原理、方法： 类似植物细胞工程 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 3、诱导融合的方法 仙台病毒 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） （细胞膜具有一定的流动性） 思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 1.其由何种细胞产生？ 2.主要分布在哪里？ 3.如何得到抗体？ 提问 ？ 思考 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 1、概念：化学性质单一、特异性强的抗体。 杂种细胞 ？ ？ 诱导其融合的方法有哪些？ 抗原 效应 B细胞 2.制备过程： 杂交 细胞 灭活的病毒等手段 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 经免疫的小鼠 提取 杂交瘤细胞 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 注射到小鼠腹腔 提取单克隆抗体 B BB B瘤 瘤瘤 瘤 细胞融合后培养液中有几种细胞 筛选杂种细胞 已知细胞合成DNA